猪呼吸道疾病综合征（PRDC）是阻碍我国养猪业发展的重要疾病。病原菌原发或继发感染是其主要原因。与PRDC相关的细菌病原主要有胸膜肺炎放线杆菌（APP）、猪链球菌（SS）、副猪嗜血杆菌（HPS）、猪多杀性巴氏杆菌（Pm）等。其中APP可以引发猪急性感染,一经发病可迅速传播,常导致中大猪急性死亡。因此,评估猪群中病原菌的感染情况并对APP临床分离菌株生物学特性等研究具有重要意义。本研究通过对湖北、广西、安徽6个规模化猪场的猪群进行临床调查,利用PCR技术并结合细菌分离鉴定,对调查地区PRDC主要细菌病原的携带情况进行分析。同时对APP临床菌株进行致病性研究,筛选APP临床强毒株。具体工作如下:1.湖北、广西、安徽地区规模化猪场病原菌感染情况调查通过采集湖北、广西和安徽6个规模化猪场656份鼻拭子样品和38份组织病料,对APP、SS、Pm、HPS、Mhp进行病原检测。PCR结果表明,APP、SS、HPS、Pm和Mhp的感染率分别为2.13%、17.38%、22.71%、4.42%和0.15%。其中,检测出单一病原菌感染的样品共210份,阳性率为32.01%,检测出两种及以上病原菌混合感染的样品共48份,阳性率为7.32%。混合感染中,双重感染的样品共47份,其中SS+HPS 31份,HPS+Pm 9份,APP+HPS 4份,SS+Pm 3份;三重感染1份,感染类型为SS+HPS+Mhp。因此,病原菌感染的情况在规模化猪场中非常严重,并且混合感染类型繁多,数量巨大,应引起警惕。2.细菌分离鉴定及耐药性分析对收集到的阳性样品进行细菌分离鉴定,通过细菌常规的分离鉴定并结合PCR鉴定,共分离到10株SS、3株HPS和1株APP。血清分型表明,共分离到5株9型SS、另外5株SS无法分型,2株4型HPS,1株5型HPS和1株5型APP。同时对实验室20株疑似APP临床菌株进行分离鉴定,得到15株APP。血清分型表明,3株1型APP、1株2型APP、3株5型APP、2株7型APP、1株8型APP、2株12型APP和3株15型APP。分别对16株APP,10株SS和3株HPS进行药敏试验,结果显示:16株APP对四环素的耐药率为62.5%,对青霉素G的耐药率为25%;10株SS耐药性复杂,对四环素的耐药率为80%,对红霉素的耐药率为70%,另有60%的SS对米诺环素耐药,个别菌株对新霉素、丁胺卡那和苯唑西林耐药;3株HPS对四环素、新霉素产生耐药;而上述菌株对头孢类抗生素全部敏感。结果表明,猪场在临床用药中应选择头孢类药物,避免使用四环素类药物,且应注重联合用药、穿梭用药等方法,避免超级耐药菌株的出现。3.APP对小鼠的致病性研究及临床强毒株的筛选通过常规的细菌分离鉴定得到16株APP。根据APP的血清型及生长特性,选取6株临床APP对小鼠的致病性进行研究。菌株编号分别为ZL-APP（1型）、AP-1（1型）、YC-15（5型）、GXYX（5型）、APP5-YXLM（5型）和HB-16（7型）。结果显示:6株APP临床菌株能够引起小鼠呼吸困难、精神萎靡、被毛粗乱等临床症状,且均对小鼠具有致死性。剖检可见肺组织严重损伤,肺内出血、粘连。通过计算临床分离菌株LD50,结果表明血清1型和血清5型的毒力明显高于血清7型,同时相同血清型的不同分离菌株之间的毒力差异较大。其中AP-1和YC-15的致病性最强,LD50分别为5×10~6CFU和7.94×10~6CFU。综上所述,筛选到APP强毒株,分别是AP-1和YC-15。