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流感,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,严重地威胁着人类、禽类和哺乳动物的健康。目前,对于流感及其并发症均缺乏特效治疗手段。传统中医药防治流感具有一定的优势,本论文以小鼠流感病毒肺炎模型为对象,研究临床有效药物加味宣肺透解剂治疗作用及其免疫学机制。 目的: 观察加味宣肺透解剂对小鼠流感病毒肺炎的药效,探讨其药效的免疫学机制,为临床广泛应用提供理论和实验依据。 方法: 1 ICR 小鼠经鼻吸入 25μl 流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株 A/FM/1/34(H1N1)(FM1) 25LD50,复制小鼠病毒性肺炎模型,并用加味宣肺透解剂进行治疗,设利巴韦林治疗对照组。观察流感病毒 FM1感染后 14d 内,小鼠体重变化和存活情况,计算生存率。 2 BALB/c 小鼠经鼻吸入 FM1 15LD50,并用加味宣肺透解剂进行治疗,感染后第 5d,(1)摘取肺脏,称重,计算肺指数,用微量血凝法测定肺组织匀浆中病毒血凝滴度;记录大体病变程度,肺脏福尔马林固定,石蜡包埋,常规切片,HE 染色,光镜下观察组织病理学改变。(2)制备脾细胞悬液,MTT 法检测 T 淋巴细胞增殖情况,生物活性法检测 T淋巴细胞分泌 IL-2 和 IFN-γ 的能力。(3) 采用 SABC 免疫组织化学法检测小鼠肺组织石蜡切片中细胞因子 MCP-1、TNF-α,以及 IL-1β、IFN-γ 和 IL-10 的表达。(4)采用双抗体夹心 ELISA 法,检测小鼠血清中细胞因子 TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10、IL-2 和 IFN-γ 含量。 结果: 1 病毒感染模型组生存率为 9.66%,加味宣肺透解剂高低剂量组分别为 68.85%、52.3%, 与病毒感染模型组比较明显升高(P <0.05),体重下降得到明显改善(P <0.05),肺指数和血凝滴度都显著降低(P <0.05)。 2 肺组织病理学研究结果显示:模型组肺脏大体病变呈实变,出血;光镜下观察组织病理学改变,呈重度间质性肺炎病变,可见支气管上皮脱落,肺泡间隔增厚,肺泡壁和细支气管壁大量单个核细胞浸润,形成实变区,肺泡腔内有少量浆液性惨出。加味宣肺透解剂治疗组与病毒感染模型组相比,无论是肺脏大体病变、组织病理学改变均有明显改善(P<0.05)。 3 与正常对照组比较,流感病毒感染后,小鼠脾脏中 T 淋巴细胞增殖能力降低(P<0.05),分泌 IL-2 和 IFN-γ 能力下降(P<0.05);与病毒感染模型组比较,加味宣肺透解剂治疗组,T 淋巴细胞增殖能力和分泌 IL-2 和 IFN-γ 能力,均显著提高(P<0.05)。 4 病毒感染模型组肺组织中细胞因子 MCP-1、TNF-α、IL-β、IFN-γ、IL-10 等的表达,与正常对照组比较,明显增强 (P<0.05);与病毒感染模型组比较,加味宣肺透解剂组MCP-1、TNF-α、 IL-1β 表达显著减少(P<0.05);而 IFN-γ,IL-10 则增多(P<0.05)。 5 与正常对照组比较,流感病毒感染模型组小鼠血清中 TNF-α、IL-6、IL-4 水平显著增高(P<0.01),IL-2 明显降低(P<0.05),IFN-γ 明显提高(P<0.05),IL-10 无明改变(P>0.05);