石上柏（Selaginella doederleinii Hieron.）为蕨类植物门卷柏科属植物深绿卷柏的全草,有清热解毒、去风除湿、活血化癖之功效,民间常用于鼻咽癌、肺癌、绒毛膜上皮癌、卵巢癌等癌症的治疗,疗效显著,副作用小。但至今鲜见有关于石上柏现代药学研究的相关报道。我们前期研究表明,石上柏的主要抗癌活性成分为双黄酮类化合物,主要集中在乙酸乙酯萃取部位。本文开展石上柏原药材含量测定及指纹图谱分析方法、总双黄酮粗提物的制备工艺及质量控制方法研究,以期为后续基于总双黄酮提取物的原料药及制剂开发奠定基础。主要研究内容及贡献如下:（1）石上柏原药材的含量测定和指纹图谱分析方法研究采用HPLC建立石上柏药材的含量测定及指纹图谱分析方法,并用于石上柏药材的质量控制分析。色谱柱为Agilent C18色谱柱（4.6×250 mm,5μm）,以乙腈--0.5%醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长270 nm,色谱运行时间为55 min。结果表明,穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄酮、2”,3”-二氢-3’,3’”-双芹菜素、3’,3’”-双柚皮素、delicaflavone、橡胶树双黄酮、7,4’,7”,4’”-四-O-甲基穗花杉双黄酮7个双黄酮成分分别在1.01-130、0.78-100、0.78-100、0.86-110、0.84-108、2.81-360、4.31-552μg/mL范围内呈良好线性关系（r≥0.999）,精密度、回收率等均符合分析方法要求。运用所建立方法测定了12批药材的7个双黄酮成分含量,其中橡胶树双黄酮含量最高,含量范围为0.191⁰.376 mg/g,穗花杉双黄酮含量次之,含量范围为0.098⁰.213 mg/g,其余各双黄酮含量范围为0.03⁰.150 mg/g之间,不同产地药材各成分含量存在差异。对12批药材进行HPLC分析,找到14个共有特征峰,建立了石上柏药材的指纹图谱,12批药材的指纹图谱相似度大于0.9,说明样品之间的一致性良好。聚类分析将12批不同产地的石上柏药材分成5类,系统聚类结果与相似度分析结果一致,两种方法得到了相互验证。上述研究所建立的分析方法简单、准确,可用于该药材的全面质量控制。（2）石上柏总双黄酮粗提物的制备工艺研究采用单因素试验和L₉（3⁴）正交试验对乙醇浓度、提取温度、时间和料液比进行考察,以提取物得率、提取物中总黄酮含量和delicaflavone含量为指标,确定最佳提取工艺为45倍量的70%乙醇,85℃提取2次,每次提取1.5 h。比较溶剂萃取法和碱溶酸沉法对石上柏醇提取物纯化效果,得到的总双黄酮粗提物的纯度分别为43.86%和39.97%。石上柏总双黄酮粗提物初步纯化工艺为合并提取液浓缩至相对密度为1.10¹.15（60℃）的清膏;依次等体积石油醚和乙酸乙酯萃取,分别萃取3次,收集乙酸乙酯层溶液,旋转蒸干,制成浸膏,冷冻干燥,粉碎即得。经过纯化后的粗提物中总双黄酮含量提高了约4倍（原来含量为9.47%）,这为后续研究奠定了基础。（3）石上柏总双黄酮粗提物的质量控制方法研究参照《中国药典》（2015版）质量标准要求,研究对石上柏总双黄酮粗提物采用薄层色谱法进行定性鉴别,并考察水分、炽灼残渣、重金属和砷盐等检查项目,采用紫外分光光度法测定总双黄酮,采用高效液相色谱法测定3个主要双黄酮（包括主要成分穗花杉双黄酮、橡胶树双黄酮及主要活性成分delicaflavone）成分的含量。结果表明,在薄层鉴别中对照品斑点相应的位置,5批样品的斑点清晰;各项检查符合要求,并确立了相应指标;同时测得5批提取物的总黄酮含量范围365.8³90.5 mg/g,穗花杉双黄酮含量范围35.3⁴3.7 mg/g、delicaflavone含量范围为15.9²0.4 mg/g、橡胶树双黄酮含量范围为39.0⁴7.2 mg/g。上述研究所建立的质量控制方法可用于双黄酮总粗提物的质量控制分析,首次为大批量的工业生产石上柏总双黄酮粗提物提供了质量控制手段。此外,通过影响因素试验（高温试验、高湿试验及光照试验）和加速试验（40°C±2°C/75%±2%RH）,研究石上柏总双黄酮粗提物的稳定性。结果表明,采用本文优化工艺生产的总双黄酮粗提物,尽管在高温高湿条件下略有吸潮,但质量基本稳定。本文研究建立了石上柏原药材的含量测定及指纹图谱分析方法、优化了总双黄酮粗提物的最佳制备工艺,并建立了石上柏总双黄酮粗提物的质量控制方法,为石上柏的抗癌药用开发奠定了基础。