花边莲提取液诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及其分子机制的研究

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目的白花蛇舌草、白英、半枝莲和半边莲均为传统抗癌中草药,具有清热解毒、活血化瘀等功效,临床上广泛应用于各种癌症的治疗,尤其对肺癌、肝癌、胃癌等有较好的疗效。目前,对上述四味中草药抗肿瘤作用机制及其活性成分尚未完全明确。而由这四味中草药组成的抗肿瘤复方诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞增殖方面,国内外文献未见相关报道。为此,本实验自拟由上述四味中草药组成花边莲(HuaBianLian, HBL)抗癌方剂,通过探讨其提取液诱导人肺癌SPC-A-1 细胞凋亡和抑制肺癌细胞增殖的效应及其分子机制,为临床应用与新药开发奠定实验基础。方法1. 取白花蛇舌草、白英、半枝莲和半边莲全草干品按常规煎熬为HBL 提取液。2. 体外培养人肺癌SPC-A-1 细胞, 实验随机分为正常对照组、HBL 处理组(浓度分别为6.3、12.5、25 和50 mg/ml) 和顺铂(DDP 25 mg/L)组。3. HBL 分别处理24h、48 h、72h 和96 h 后,采用细胞毒(MTT 法) 实验检测肺癌细胞抑制率和IC50。4. 药物处理48 h 后,用荧光显微镜观察细胞形态变化,DNA 琼脂糖凝胶电泳测定DNA 梯状条带(DNA ladder)。5. 药物处理48 h 后,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。6. 药物处理48 h 后,二步法免疫组化检测P53、Survivin、NF-κB 和Bcl-2蛋白表达的变化。7. 药物处理48 h 后,半定量RT-PCR 检测survivin mRNA 和caspase-3 mRNA 表达的变化。
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