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乳腺癌是女性肿瘤死亡的主要原因之一。乳腺癌细胞对药物治疗有先天性或获得性耐药,因而治疗比较困难。有研究报道,大约30%的乳腺癌患者伴有复发和转移。肿瘤一旦出现转移,多数患者很难通过化疗、手术获益。因乳腺癌是一种激素依赖性肿瘤,所以雌激素受体(Estrogen receptors ER)的功能严重影响着激素性乳腺癌的发生发展,它的表达水平与乳腺癌病理分级和淋巴结转移显著负相关。他莫昔芬(Tamoxifen TAM)是乳腺癌内分泌治疗的典型代表,主要作用靶点为ER,它通过调控ER进而影响细胞周期和细胞凋亡发挥治疗作用的。但有40%的乳腺癌患者TAM治疗耐药。非编码小分子RNA(micro RNA,mi RNA)是一类非编码微RNA分子,通过与靶信使核糖核酸(messenger RNA,m RNA)的3’UTR序列特异性碱基配对而发挥转录后水平的基因表达调控。mi RNA被认为是生物学过程中广泛的调节物,已发现与多种肿瘤的进展及耐药相关。如mi RNA与肾透明细胞癌、头颈部肿瘤、肺癌和卵巢癌的产生及不良预后密切相关,其参与了一系列生物过程调节,如细胞分化、凋亡、增生和侵袭。在卵巢癌及儿童肾肿瘤组织中,微RNA-204(mi R-204)表现缺失,胃癌中过表达的mi R-204可以降低癌细胞的聚集和迁移。曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是有效的去乙酰化转移酶(HDACs)抑制剂,其源于链霉菌代谢产物,TSA可以提高多种抑癌转录因子的乙酰化水平,抑制多种肿瘤细胞生长并诱导其凋亡。为了研究TSA在乳腺癌中的功能,本文采用TSA干预乳腺癌细胞及乳腺癌动物模型。实时荧光定量(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测乳腺癌细胞mi R-204及雌激素受体α(Estrogen receptors ERα,ERα)的表达水平,阐明TSA抑制乳腺癌细胞增生的机制。第一部分:TSA抑制MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞增生的分子机制研究目的:从分子生物学水平研究TSA对MCF-7和MDA-MB-231细胞的抑制作用。方法:采用TSA处理MCF-7和MDA-MB-231细胞,检测1)IC50及细胞存活率;2)RT-PCR测ERα和mi R-204的表达水平;3)经mi R-204转染后,测ERα表达水平。结果:1)TSA单独或联合TAM对MCF-7和MDA-MB-213细胞有明显的抑制作用;2)TSA可以抑制乳腺癌细胞mi R-204表达,增加ERα的表达水平;3)mi R-204表达下调可增加MDA-MB-231细胞对TAM的敏感性。结论:TSA可能通过抑制乳腺癌细胞mi R-204表达、增加ERα水平而抑制细胞增生的。第二部分:TSA联合TAM对乳腺癌细胞AKT信号通路的影响目的:从细胞生物学水平研究TSA对乳腺癌细胞信号通路的影响方法:采用RT-PCR检测乳腺癌细胞Caspase-3、Mcl-1及磷酸化AKT的表达水平,探讨TSA抑制乳腺癌细胞增生的AKT信号通路。结果:TSA、TAM或抗mi R-204处理的乳腺癌细胞Caspase-3表达增加、Mcl-1及磷酸化AKT表达减少。结论:TSA和TAM通过阻止AKT磷酸化,抑制AKT信号通路而抑制乳腺癌细胞增生的。第三部分:TSA联合TAM抑制MCF-7和MDA-M B-231细胞裸鼠种植瘤的增生目的:从动物体内检测TSA和TAM对乳腺癌细胞增生的抑制作用。方法:构建乳腺癌裸鼠动物模型,经TSA、TAM干预,测量乳腺癌细胞种植瘤的体积及ERα的表达。结果:TSA明显减小乳腺癌细胞裸鼠种植瘤的体积,联合TAM时抑制作用更为明显。同时发现TSA干预的乳腺癌种植瘤ERα表达增加。结论:TSA能抑制乳腺癌细胞种植瘤的增生,可能促进种植瘤ERα表达。