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蛋白质是饲料中最昂贵的营养物质,而糖是最经济的能量来源,提高糖的利用效率不仅能降低饲料成本、起到节约蛋白质效应,而且能减少对养殖水体的污染。糖的有氧氧化效率与糖代谢过程中限速酶的活性密切有关,其中,丙酮酸脱氧酶和α-酮戊二酸脱氢酶是糖酵解产物丙酮酸进入线粒体进行有氧氧化分解的限速酶,而硫辛酸(α-lipoic acid,α-LA)作为这两种限速酶的辅因子,可催化氧化脱羧过程,在糖的分解代谢中发挥重要作用。日本沼虾(Macrobrachium nipponense)是我国和东南亚一些国家的主要的淡水经济养殖种类之一,其对鱼粉蛋白需求量高,对糖的利用能力有限。因此,为了探索α-LA对日本沼虾糖代谢的影响,本论文采用营养学、生理生化和分子生物学方法,系统地研究了日本沼虾对硫辛酸的需求量、两种糖水平下α-LA对日本沼虾生长、抗氧化、糖代谢、肝胰腺结构和肠道菌群的影响,以及在不同蛋糖比饲料中添加α-LA对日本沼虾生长和能量代谢的影响。论文的主要结果和结论如下:1.日本沼虾硫辛酸需求量及其介导抗氧化、糖代谢和肠道菌群的影响研究α-LA不仅是一种天然抗氧化剂,而且是糖分解代谢关键酶丙酮酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶的重要辅酶。本试验以均重为0.050±0.003 g的1250尾健康日本沼虾为研究对象,配制了5个α-LA水平(0、500、1000、2000和4000 mg/kg)的等氮等能半纯化饲料,分别命名为LA1、LA2、LA3、LA4和LA5组,进行了为期8周的养殖试验。结果如下:(1)相比其它各组,LA5组的增重率、特定生长率和存活率显著降低(P<0.05);(2)LA3组丙二醛(MDA)含量显著低于其他各组(P<0.05),但LA4和LA5组MDA含量显著高于其余3组(P<0.05);同时LA3组的谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于其他各组(P<0.05);(3)LA3组糖酵解关键酶(丙酮酸激酶,PK;6-磷酸果糖激酶,PFK;己糖激酶;HK)和异柠檬酸脱氢酶(ICDH)活性显著高于其他各组(P<0.05),但LA3组的乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于LA1和LA2组(P<0.05);(4)在操作分类单位(OTU)水平上的肠道菌群分析表明,LA5组丰度(Chao指数)和多样性(Simpson指数)显著低于LA1和LA3组(P<0.05),LA3和LA5组变形菌门(Proteobacteria)和柠檬酸杆菌属(Citrobacter)的相对丰度均显著高于LA1组(P<0.05)。LA5组放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、气单胞杆菌属(Aeromonas)、Tyzzerella_3属和支分枝杆菌属(Mycobacterium)的相对丰度显著高于LA3和LA1组(P<0.05)。由此可见,饲料中添加适宜的α-LA可提高日本沼虾的抗氧化能力、糖代谢酶活性和肠道菌群稳定性,但过量的α-LA(4000 mg/kg)对日本沼虾的生长性能和抗氧化产生负面影响。以超氧化物歧化酶活性和增重率为指标制作折线模型表明,日本沼虾中α-LA的最适添加量分别为995.83 mg/kg和1354.8 mg/kg。2.两种糖水平下硫辛酸浓度对日本沼虾生长、抗氧化、肝胰腺结构及糖代谢的影响研究为了进一步验证α-LA对日本沼虾糖利用效率提高的作用,试验以玉米淀粉为糖源,配制了2种糖水平(15%和30%)、3种α-LA浓度(0、700和1400 mg/kg)2*3因子的试验饲料,饲喂均重为(0.050±0.003)g的日本沼虾,养殖试验持续8周。结果如下:(1)在15%糖水平下,摄食1400 mg/kgα-LA虾的增重率显著低于其余两组(P<0.05);两种糖水平下,摄食700 mg/kgα-LA虾的存活率显著高于0和1400 mg/kgα-LA组(P<0.05);(2)两种糖水平下,摄食1400 mg/kgα-LA虾的HK和PK活性最高,同时700和1400 mg/kgα-LA显着提高了PFK、丙酮酸脱氢酶(PDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性(P<0.05);(3)MDA含量随着α-LA的增加显著降低(P<0.05);与未摄食α-LA虾相比,摄食700或1400 mg/kgα-LA可使SOD和GSH-Px活性及GSH含量显著升高(P<0.05);(4)α-LA对肝胰腺的整体结构没有影响,但1400 mg/kgα-LA减少了其肝胰腺分泌细胞(B细胞)数量;(5)在30%糖水平下,随着α-LA的增加,Chao指数和ace指数显著升高(P<0.05),摄食700 mg/kgα-LA虾的Shannon指数最低(P<0.05)。由此可见,两种糖水平下添加700mg/kgα-LA可改善日本沼虾抗氧化状态、糖分解代谢、肝胰腺结构和肠道菌群稳定性,在含30%糖水平的饲料中补充α-LA可有效提高该虾对糖的利用效率。3.不同蛋糖比饲料中添加硫辛酸对日本沼虾生长、抗氧化、糖代谢、肝胰腺结构及能量代谢相关基因表达的影响研究为验证α-LA提高日本沼虾糖代谢效率后的节约蛋白质效应,本试验以初重为(0.11±0.01 g)的健康日本沼虾为研究对象,配制2种α-LA水平(0 mg/kg和1300 mg/kg)和3种蛋糖比(P41/C18、P37/C24和P33/C30)2*3因子的等脂等能半纯化饲料,进行为期50天的养殖试验。结果表明:(1)α-LA可显著提高日本沼虾的存活率(P<0.05),在P41/C18和P37/C24时,摄食1300 mg/kgα-LA虾的增重率和特定生长率显著低于0 mg/kgα-LA组(P<0.05),而在P33/C30时,摄食0和1300 mg/kgα-LA虾的增重率和特定生长率无显著差异(P>0.05);(2)与0 mg/kgα-LA组相比,摄食1300 mg/kgα-LA虾的糖酵解关键酶HK和PK,以及PDH的活性显著提高(P<0.05);(3)蛋糖比例和α-LA浓度对能量代谢中腺嘌呤核糖核苷酸依赖的蛋白激酶(AMPKα和AMPKβ)、糖酵解关键酶(HK)、磷酸戊糖途径关键酶(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,G6PDH)、三羧酸循环相关酶(苹果酸脱氢酶,MDH)、脂肪合成关键酶(乙酰辅酶A羧化酶,ACC)和脂肪酸转运关键蛋白(脂肪酸结合蛋白,FABP 10)的基因表达均有极显著的交互作用(P<0.01);低蛋糖比组(P33/C30)摄食1300 mg/kgα-LA虾的肝胰腺中AMPKα、AMPKβ、G6PDH、HK、PEPCK和MDH基因表达极显著高于0 mg/kgα-LA的虾(P<0.01);在高蛋糖比时,α-LA的添加显著提高ACC基因的表达(P<0.05);(4)在P41/C18和P37/C24时,发现α-LA的添加引起了促氧化作用,肝胰腺结构遭到破坏且其B细胞数量减少;然而,在P33/C30时,α-LA的添加使日本沼虾抗氧化能力增强,同时改善肝胰腺结构,B细胞数量增多。由此可见,在本试验条件下添加1300 mg/kgα-LA对摄食低蛋糖比(P33/C30)下的日本沼虾生长性能无显著影响,但可显著提高其存活率、抗氧化能力以及糖和能量代谢,同时可以改善虾的肝胰腺结构,具有节约蛋白质的效应。