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【目的】放疗作为食管癌患者最有效的治疗手段之一,如何提高放疗的效果成为如今的研究热点。研究显示表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocathechin-3-gallate,EGCG)可以增加鼻咽癌的放疗敏感性,但EGCG是否可以增加食管癌的放射敏感性尚不清楚。本课题旨在研究EGCG对人食管鳞癌TE-1细胞放射敏感性的影响,进而探究凋亡和自噬在其中发挥的作用,寻找促进食管鳞癌放射敏感性的方法。【方法】(1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(20、40、60、80μg/ml)的EGCG分别作用24、48、72小时对食管鳞癌TE-1细胞的生长抑制作用,确定EGCG最适工作浓度。80μg/ml EGCG与不同剂量的X射线(2、4、8Gy)联合应用对TE-1细胞的抑制效应,确定最适工作剂量。自噬抑制剂3-MA预处理食管鳞癌细胞TE-1后,检测EGCG和X射线联合处理对细胞增殖能力的影响。(2)将实验分为空白对照组、EGCG组(培养液中EGCG终浓度为80μg/ml)、X射线组(放射剂量为4Gy)、EGCG+X射线组(培养液中EGCG终浓度80μg/ml+放射剂量4Gy)四组,克隆形成实验记录四组含大于50个细胞的克隆个数,流式细胞法检测四组细胞的凋亡率。X射线单独作用或与联合EGCG作用于TE-1细胞,通过克隆形成实验检测单纯放射组和放射联合EGCG组两组TE-1细胞放射敏感性的变化。(3)免疫印迹法(Western blot法)检测不同处理组TE-1细胞中Cleaved caspase-3、Bcl-2、LC3-II、Belin1蛋白的相对表达情况,荧光倒置显微镜观察自噬小体荧光量的变化。(4)自噬基因Beclin1小干扰RNA(siRNA-Beclin1)处理食管鳞癌细胞TE-1后,采用MTT法和Western blot法检测EGCG和X射线联合处理后TE-1细胞的增殖能力及LC3-II表达水平的变化。【结果】(1)EGCG抑制食管鳞癌TE-1细胞的增殖,呈时间和剂量依赖效应,选择80μg/ml作用48小时作为最适工作浓度。EGCG可以使X射线生长抑制作用加强,选用4Gy X射线作为联合放射组和单纯放射组的最适工作剂量。自噬抑制剂3-MA预处理食管鳞癌细胞TE-1后减弱了EGCG对TE-1细胞的生长抑制。(2)与空白对照组、EGCG组、X射线组相比,EGCG+X射线组造成TE-1细胞克隆个数显著减少,细胞凋亡率显著降低。细胞存活曲线显示与单纯放射组相比,放射联合EGCG组,D0、Dq值均变小,放射增敏比为1.19。(3)不同浓度EGCG处理TE-1细胞48小时后,LC3-II、Beclin1表达量与剂量呈正相关。EGCG+X射线组,与空白对照组、EGCG组、X射线组相比,Bcl-2相对表达量显著降低,Cleaved caspase-3、LC3-II、Beclin1表达量明显升高且自噬体荧光量明显增多。(4)用siRNA-Beclin1处理食管鳞癌细胞TE-1后,EGCG联合X射线对其LC3-II的上调作用明显减弱,对TE-1细胞生长的抑制作用也明显减弱。【结论】(1)EGCG与X射线均对人食管鳞癌TE-1细胞有细胞毒性作用。(2)EGCG能增加人食管鳞癌TE-1细胞的放疗敏感性。(3)EGCG增加人食管鳞癌TE-1细胞的放疗敏感性的机制可能是下调Bcl-2蛋白和上调Beclin1蛋白的表达,诱导食管鳞癌TE-1细胞发生凋亡和自噬,最终导致细胞死亡。