类风湿关节炎(RA)是一个累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫疾病，其病理为慢性滑膜炎，侵及下层的软骨和骨，造成关节破坏，RA的病因至今不明，目前也尚无特效治疗手段。T、B淋巴细胞，尤其是CD4+T淋巴细胞引发的滑膜巨噬细胞和成纤维细胞的过度激活和增殖是RA病变形成的最重要细胞学基础。在RA的病变滑膜，可以看到大量T淋巴细胞围绕新生血管分布及由T、B淋巴细胞组成的类似淋巴结的结构。这种病理性淋巴细胞的聚集是病变关节滑膜炎形成的关键因素，而在这种炎性细胞的定向趋化和聚集过程中，趋化因子受体及其配体发挥着极其重要的作用。　　趋化因子(Chemokine)是一类含70～90个氨基酸残基的分泌型细胞因子。根据其分子内特定半胱氨酸的数量及位置可分为CXC、CC、C、CX3C四个亚族，趋化因子具有激活各类白细胞，促进其游走聚集，引起炎症反应的功能，趋化因子受体5(CCR5)是CC亚族趋化因子MIP-1a（巨噬细胞炎性蛋白-1 a）、MIP-1β和RANTES（正常T细胞活化后表达和分泌的调节蛋白）的特异性受体。在已知的趋化因子受体中，CCR5及其配体RANTES及MIP-1在RA的病理形成过程中具有重要意义。在人类RA患者及RA模型鼠的滑膜组织，CCR5的表达均较正常对照显著增强，且其配体的表达也明显提高。相关研究说明CCR5及其配体作用经路在RA滑膜炎性细胞趋化和浸润过程中扮演重要角色，寻找一种真正可以用于临床的抑制CCR5表达的方法是一项非常有意义的工作。　　RNA干扰技术（RNA interfering，RNAi）是利用生物进化过程中保存下来的一种mRNA表达抑制机制，人工引入互补的小干扰RNA，最终实现目的基因表达抑制-即基因沉默(gene silencing)的技术。该技术具有效率高，靶向性强等特点。目前，RNAi技术已被广泛地应用于基因功能鉴定、恶性肿瘤、病毒性肝炎及艾滋病治疗等多个医学领域。作为HIV病毒感染人CD4+巨噬细胞的必须协同受体，利用RNAi技术抑制CCR5表达的工作在艾滋病领域得到了深入研究，并显示了很好的临床应用前景。而在RA领域，目前尚无应用RNAi抑制CCR5表达的研究，我们将通过体外研究构建大鼠CCR5 mRNA的siRNA表达质粒，并通过293T工具细胞筛选出特异性质粒，采用大鼠佐剂关节炎模型，通过在体电穿孔的方法进行RNA干扰，抑制其CCR5 mRNA的表达，以明确该方法的有效性和安全性，从而为RA的治疗探寻一种有效的新的治疗方法。　　方法:　　1、根据靶基因设计原则设计并构建大鼠CCR5 siRNA表达质粒及CCR5过表达质粒，利用脂质体转染法共转染293T细胞，应用Westemblot检测rCCR5蛋白表达水平， real time PCR检测rCCR5 mRNA表达水平，筛选出特异性CCR5 siRNA表达质粒。　　2、建立AIA大鼠模型，电穿孔法进行动物在体的CCR5 siRNA质粒转染，荧光显微镜观察转染位置及效果。临床观察大鼠一般情况、关节肿胀度、关节炎指数及关节滑膜病理评分，Western Blot及real time PCR分析CCR5蛋白及mRNA表达的情况，评估CCR5基因治疗效果。　　结果:　　1、各组质粒共转染293T细胞后，在倒置荧光显微镜下见到细胞内发出均匀明亮的绿色荧光。转染后24小时，荧光显微镜下观察，表达EGFP的阳性细胞百分比，67±3.2％。　　2、293T细胞共转染后36小时检测CCR5蛋白及mRNA表达水平，D1质粒相比其它3组质粒及NC质粒对CCR5的干扰抑制作用最强，(P＜0.01)，为有效筛选靶点。　　3、动态观察Wistar大鼠转染后1～5天，转染后1天可以看到EGFP蛋白的表达，表达强度随着时间逐渐增高，3天时达高峰，之后EGFP的表达随时间的延长而逐渐减低，而在对侧未干扰关节未发现荧光的表达。　　4、Wistar大鼠FCA免疫后7天起出现部分大鼠关节红肿，第14～18天FCA组大鼠100％出现关节红肿，第28天达最高峰。CCR5 RNA干扰治疗后AIA大鼠体重下降程度及关节炎指数改善，左侧关节肿胀度明显改善。　　5、CCR5 RNA干扰治疗后AIA大鼠局部滑膜病理学评分明显改善(P＜0.05)对侧未观察到改善。　　6、CCR5 RNA干扰治疗后滑膜CCR5蛋白及mRNA表达均明显降低(P＜0.01)　　结论:　　1、D1 siRNA组与未转染对照组、阴性序列对照组、其它siRNA组比较，能有效抑制大鼠CCR5的蛋白表达。　　2、D1 siRNA组与未转染对照组、过表达CCR5质粒组、阴性序列对照组比较，能有效抑制大鼠CCR5 mRNA表达。　　3、D1 siRNA针对大鼠CCR5 mRNA的靶序列为CAGGGATCTATCACATTGGTT。　　4、CCR5 RNA干扰治疗可以改善AIA大鼠的临床症状及关节炎指数，明显改善AIA大鼠的局部关节肿胀度。　　5、CCR5 RNA干扰治疗可以明显改善AIA大鼠局部关节的病理过程。　　6、CCR5 RNA干扰治疗主要作用于局部关节，对对侧及双前肢关节炎症无明显治疗作用。　　7、成功的进行CCR5 siRNA表达质粒在体电转染，为今后关节局部基因治疗提供了有效的治疗手段。