利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达人Cyclin D1/CDK4基因及生物活性鉴定

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该文的目的是获得人重组细胞周期蛋白(Cyclin D1)及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白,作为抗癌药物筛选的分子靶点.应用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)在昆虫细胞Tn-5B1-4中分别高效表达了人Cyclin D1和CDK4.SDS-PAGE分析表达量占细胞可溶性蛋白质的20﹪左右,表达产物经Ni<2+>-NTA树脂亲和层析纯化后纯度达85﹪以上.活性研究表明,昆虫细胞表达的Cyclin D1和CDK4蛋白能显著促进Rb蛋白的磷酸化,具有生物活性.为进一步建立抗癌药物筛选的靶点奠定了基础.
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