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目的:革兰氏阴性菌外膜内毒素(LPS)是引起严重创伤、大面积烧伤患者并发全身炎症反应综合征(SIRS)、脓毒症以及多器官功能障碍综合征(MODS)的重要因素。目前尚无有效的LPS拮抗剂应用于临床,已经发现杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)对革兰氏阴性菌具有杀菌及中和内毒素的作用。笔者所在单位根据BPI的分子结构,设计并合成出了具有BPI生物学活性的模拟肽BNEP。体内外实验表明BNEP能够中和内毒素,对内毒素血症动物具有明显的保护作用。鉴于肺脏是LPS所致MODS中最易受累的器官,本实验将对BNEP在LPS所致急性肺损伤(ALI)中的保护作用进行研究。为探索可用于临床的内毒素拮抗剂提供一定的实验依据。 方法:选用BALB/C小鼠,采取经鼻滴注LPS的方式复制ALI模型,LPS滴注后取不同时相点检测小鼠肺湿重增加率、肺病理学变化,以验证动物模型是否可行、可靠。然后将小鼠随机分为对照组、LPS组、BNEP组,对照组滴注生理盐水、LPS组滴注LPS(500μg/kg体重),BNEP组滴注LPS后立即尾静脉注射BNEP(10mg/kg体重),各组小鼠处理后48h取肺检测湿干重比、肺血管通透性(肺内Evans蓝含量)、肺病理学变化:另在上述方法处理后3h再取各组小鼠用免疫组织化学的方法检测肺内LPS受体TLR2、TLR4的表达情况。对比上述检测结果,以观察BNEP对小鼠ALI的影响。 结果:LPS滴注后4h小鼠肺湿重开始增加,8h、12h、24h肺湿重呈渐增趋势,48h肺湿重增加达高峰(51.9%),随后开始下降,72h湿重仅增加14.3%;病理切片中可见小鼠肺充血、肺泡及肺间质水肿、出血、以中性粒细胞为主的炎性细胞浸润,肺泡壁增厚,肺泡内透明膜形成,这些病理改变亦随时间呈渐进性加重,在48h达到高峰。对照组小鼠在经鼻滴入生理盐水后48h,肺组织结构清晰完整,无炎症反应等ALI典型病理变化:LPS组小鼠肺病理学检查则显示上述急性炎症反应的特征,湿干重比以及肺内Evans蓝含量与对照组相比明显增加,BNEP处理后小鼠肺湿干重比减小、肺血管通透性降低、病理变化减轻,各项指标与LPS组比较有显著改善。免疫组化发现对照组小鼠肺内有少量TLR2、TLR4表达,主要存在于肺泡巨噬细胞、肺泡Ⅱ型上