目的：自然杀伤T（natural killer Tcells，NKT）细胞是一类能够识别非经典的MHCⅠ类分子CD1d所递呈的糖脂抗原的特殊类型的T淋巴细胞，同时表达NK和T细胞表面标志NK1．1和TCR。NKT细胞经内源性配体鞘糖脂iGb3（isoglobotrihexosylceramide）和外源性糖脂配体α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer）活化后能够分泌IFN-γ、IL-4和IL-13等多种细胞因子，在抗肿瘤、抗病毒感染、自身免疫耐受和自身免疫性疾病中发挥着重要作用。但由于激活后的NKT细胞能够同时分泌Th1和Th2两型细胞因子，影响了iGb3或α-GalCer对免疫相关疾病的治疗效果，因而限制了其临床应用。因此，若能发现有效的途径，积极调控两型细胞因子的相对产生量，糖脂分子将会在临床应用中发挥更广泛的作用。 研究发现对α-GalCer的鞘鞍醇链进行截短所得的类似物OCH，可通过降低糖脂分子-CD1d复合物的稳定性和增强糖脂分子-TCR的亲和力来实现IL-4的优势分泌。而另有研究表明将连接糖基部分与另外两条链的O原子用C原子代替后产生的α-GalCer类似物α-C-GalCer，可以通过增强糖脂分子各部分之间连接的稳定性而延长了与CD1d和NKT细胞作用的时间来实现IFN-γ的优势分泌。提示，针对性改造糖脂，可以诱导NKT细胞Th1/Th2型细胞因子的分泌。虽然有众多学者设计不同的位点对糖脂行各种修饰改造，并分析改造后的糖脂活化NKT细胞方面功能和结构的差异，但目前缺乏对于内源性配体iGb3进行改造的研究。 鉴于此，我们对iGb3和α-GalCe进行修饰，获得了一批化学修饰的iGb3和α-GalCe类似物，在前期工作中，我们初步筛选出两种类似物4-HO-iGb3和4-dh-iGb3具有优势诱导小鼠肝脏NKT细胞Th1型细胞因子的分泌能力。本研究采用四聚体染色法进一步筛选并确定经过化学修饰的iGb3类似物细胞因子的优势分泌，并在此基础上，深入探讨糖脂/APC/TCR间的相互作用以及细胞微环境等一些影响NKT细胞因子分泌的重要因素，为糖脂类分子的设计和临床应用提供新的策略和依据。 方法： （1）流式细胞术法检测iGb3类似物和α-GalCer类似物对小鼠肝脏、脾脏中NKT细胞的数量和胞内细胞因子IFN-γ和IL-4的表达情况，以及转录因子STAT1和STAT6的STAT1磷酸化水平。 （2）体外诱导小鼠骨髓来源树突装细胞的分化和成熟。 （3）ELISA法检测化学修饰的iGb3类似物作用后小鼠血清中和细胞培养上清中细胞因子IFN-γ和IL-4的分泌水平。 （4）实时定量PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞中IFN-γ、IL-4、GATA-3和T-bet的基因表达情况。 （5）QSAR软件分析糖脂分子与NKT细胞上TCR受体以及APC细胞上CD1d分子的亲和力高低。 （6）蛋白质免疫印迹检测iGb3类似物对小鼠脾脏淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3的蛋白表达情况。 结果： 一、化学修饰的iGb3类似物4”’-dh-iGb3优势诱导小鼠肝脏和脾脏NKT细胞分泌IFN-γ 予C57BL/6小鼠腹腔注射iGb3及其类似物，发现与iGb3刺激组相比，化学修饰的iGb3类似物4-dh-iGb3虽然并不增加肝脾NKT细胞的比例和数量，但可明显增强肝脾NKT细胞胞内IFN-γ的表达、分泌及血清中IFN-γ水平，而对Th2类细胞因子IL-4的表达和分泌无明显影响。用骨髓来源的DC负载糖脂，体外刺激小鼠的NKT细胞系，检测NKT细胞胞内细胞因子表达和上清细胞因子含量，亦得到了类似的结果。 二、4-dh-iGb3可增强糖脂与CD1d、糖脂与NKT细胞TCR之间的结合力和稳定性运用QSAR软件，在计算机上模拟糖脂、抗原递呈细胞的CD1d分子以及NKT细胞的TCR分子的空间结构，并进行分子结构之间的对接，发现在iGb3鞘鞍醇链引入HO可以形成一个疏水键，与原来酰基链上现有的HO一同直接地深入到CD1d分子形成的疏水性抗原结合口袋中，而增强了与CD1d分子上氨基酸Asp8O（C）之间的亲和力；对糖基进行脱氧处理，使糖脂在与TCR分子氨基酸Lys167结合的空间位置由糖脂的此侧转变为糖脂的彼侧，使糖脂与TCR之间的结合分数由原来的3．3显著提高到4．9，增加了4-dh-iGb3与NKT细胞TCR的结合能力。即：修饰后的4-dh-iGb3具有较iGb3更强的与抗原递呈细胞CD1d分子结合的亲和力及与NKT细胞TCR结合的稳定性。 三、4-dh-iGb3能够上调Th1类细胞因子相关转录因子STAT1的磷酸化和T-bet的表达水平予C57BL/6小鼠腹腔注射iGb3及其类似物或体外刺激小鼠的NKT细胞系，观察NKT细胞调控Th1/Th2类细胞因子表达相关转录因子的表达情况，发现与iGb3相比，4-dh-iGb3能够上调NKT细胞调控Th1类细胞因子产生的转录因子STAT1的磷酸化和T-bet的表达，而调节Th2类细胞因子产生的转录因子STAT6的磷酸化和GATA-3的表达差异不显著。 结论： （1）iGb3类似物4-dh-iGb3能够诱导小鼠NKT细胞优势分泌Th1类细胞因子IFN-γ。 （2）4-dh-iGb3可提高糖脂与CD1d、糖脂与NKT细胞TCR之间的稳定性和亲和力，从而促进NKT细胞的活化和Th1类细胞因子的分泌。 （3）4-dh-iGb3可增强调控Th1/Th2分化的转录因子STAT1的磷酸化和T-bet的表达，从而促进NKT细胞IFN-γ的表达和分泌。 （4）4-dh-iGb3可以作为新型免疫增强剂用于抗肿瘤和感染性疾病的治疗。