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本文从安徽铜陵狮子山硫化物矿山酸矿水溪流及其底泥中获得样品,采用YE、Feo、FeSo、FeTo四种选择性培养基,利用overlay分离技术,获得12株细菌菌株。利用16S rRNA基因序列同源性分析,与目前文献报道已分离得到的酸矿水及其底泥中微生物进行了比较。利用分离菌株16S rRNA基因序列构建系统进化树,结果表明获得的菌株可分为3个功能群:嗜酸性异养菌、嗜酸性自养菌、中度嗜酸性铁氧化细菌。嗜酸性异养菌主要与酸矿水中三价铁的异化还原和寡营养状态的维持有关;嗜酸性自养菌与酸矿水中铁、硫元素的氧化有关,是酸水中的生产者;中度嗜酸性铁氧化细菌能将二价铁氧化成三价铁,并产生难溶性次生矿物,可实现酸矿水与酸矿水底泥之间铁元素的动态平衡。
利用多相分类法对分离自酸矿水底泥的菌株NJU-AMDS2进行系统生物学鉴定。菌株NJU-AMDS2表现性特征如下:菌体为杆状,革兰氏阴性,无芽孢,菌体大小(长×宽):1-3μm×0.2-0.3μm,菌体可进行滑动运动。菌落呈锈红色,表面干燥,呈近圆形,边缘不规则。菌株NJU-AMDS2在R2A培养基中,最适生长盐度为0%,最适生长pH值为6.0,最适生长温度在30-37℃之间。菌株NJU-AMDS2能利用对硝基-β-D甲基半乳糖、蔗糖、D-核糖、乳糖、半乳糖、松二糖、松三糖、N-乙酰葡萄糖胺、β-半乳糖苷、蜜二糖为唯一碳源进行生长。菌株NJU-AMDS2具有细胞色素氧化酶、谷氨酰芳胺酶、氨基乙酸芳胺酶、谷氨酸-甘氨酸-精氨酰芳胺酶、丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酰芳胺酶、磷酸酶、半乳糖苷酶(α、β)、β-葡萄糖苷酶、N-乙酰-β-葡萄糖苷酶活性。菌株NJU-AMDS2的系统发育进化树分析结果表明,菌株NJU-AMDS2属于Chitinophagaceae科,与Sediminibacterium sp.菌株Sediminibacterium salmoneum构成一个分支,其16SrDNA全序列的同源性达92%。菌株NJU-AMDS2在基因组DNA(G+C)含量(44.4mol%)和主要脂肪酸(iso-C15:0,47.39%;iso-C17:03-OH,13.42%)方面,与Chitinophagaceae科其他属菌株间存在较大差异。菌株NJU-AMDS2所含主要醌类物质为甲基萘醌MK-7,与Chitinophagaceae科其他属菌株所含主要醌类一致。综上所述,初步断定菌株NJU-AMDS2是Chitinophagaceae科一个新属的典型种。
对菌株NJU-AMDS2进行了性质研究,发现菌株NJU-AMDS2在FeTSB液体培养基中的最适pH为4.5,最适亚铁离子浓度为1mM,最适生长温度在30-35℃之间。此外,通过研究还发现菌株NJU-AMDS2具有氧化Fe2+能力,氧化方式为接触式氧化,氧化速率达62.35±1.86μg/(min·mg蛋白),氧化Fe2+能力远弱于氧化亚铁硫杆菌(A.f),仅为其氧化速率的1/7。在低Fe2+浓度下,菌株具有较强的氧化速率和氧化能力,Fe2+氧化比例随培养液中Fe2+浓度升高而降低。采用含不同浓度Fe2+的培养基对菌株NJU-AMDS2进行培养前处理,发现对菌株NJU-AMDS2进行Fe2+饥饿处理,可显著增强菌株NJU-AMDS2氧化Fe2+能力和氧化速率,但对Fe2+氧化比例的影响不显著。