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由水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻条纹叶枯病给我国水稻生产造成了严重的损失。该病毒由昆虫介体灰飞虱以持久方式传播,并可经卵垂直传播给后代。诸多学者已在RSV致病机理、介体传播机制、抗性品种选育及防控技术等方面进行了大量研究,取得了一系列成果。植物源天然产物中蕴含着很多抗病毒活性成分,目前有关抗RSV天然产物的报道较少,筛选具有抑制RSV活性的天然产物,对于开发可抑制病毒的生物源农药具有重要意义。本研究首先明确了RSV对昆虫细胞的侵染特性,并以此对候选天然产物的抗病毒活性进行评价,发现多种提取物可抑制RSV侵入细胞,进一步分析了天然产物ZLNT在细胞水平和灰飞虱体内对病毒的抑制效果。
1、RSV可侵染昆虫细胞。将水稻和灰飞虱来源的病毒接种培养的昆虫细胞,然后对病毒侵染细胞的情况进行检测,结果表明RSV可侵染昆虫细胞,并且随着时间增加,RSV在细胞中的积累量逐渐增加;病毒定位于细胞质进行复制增殖,其基因组表达特性与在灰飞虱体内相似。
2、筛选有抑制RSV活性的天然植物源提取物。通过MTT法确定各候选天然产物的安全浓度。安全浓度范围内,采用两种作用方式(1.先病毒侵染后施加产物,2.先施加产物后病毒侵染)分析天然产物对RSV的抑制作用。结果显示,在RSV进入细胞后,各候选产物对病毒的复制增殖没有明显的抑制作用;天然产物ZLNT、ZCh、ZCu、ZE、ZM对RSV侵入昆虫细胞过程有明显的抑制作用,抑制率均高于60%,表现出阻止病毒侵入的抗病毒保护作用。
3、天然产物ZLNT在细胞水平对RSV的抑制特性。对ZLNT作进一步分析,明确ZLNT对RSV侵入细胞的抑制效果与浓度成正相关。200μg/mL浓度处理细胞,接种病毒3h后,对病毒侵入的抑制率高达90%,抑制效果最好,IC50为29.85μg/mL。另外,ZLNT对RSV有直接灭活作用,但直接灭活作用效果弱于阻止病毒侵入作用。
4、ZLNT在灰飞虱中对RSV的抑制作用。饲喂无毒灰飞虱ZLNT后进行饲毒试验,结果显示ZLNT处理灰飞虱后,其获毒率和病毒含量显著低于对照组,说明ZLNT可抑制RSV侵染中肠细胞进入虫体。饲喂带毒灰飞虱ZLNT,6d后检测,发现ZLNT试验组中灰飞虱体内病毒基因和蛋白表达量与对照组无显著差异,说明ZLNT对RSV进入虫体后的复制没有明显的抑制作用。ZLNT在灰飞虱体内对病毒的作用效果与细胞水平的作用效果基本一致。
本论文研究结果为开发抑制灰飞虱传毒的生物源药剂、寻找防控水稻条纹叶枯病的新途径提供了参考和理论依据。
1、RSV可侵染昆虫细胞。将水稻和灰飞虱来源的病毒接种培养的昆虫细胞,然后对病毒侵染细胞的情况进行检测,结果表明RSV可侵染昆虫细胞,并且随着时间增加,RSV在细胞中的积累量逐渐增加;病毒定位于细胞质进行复制增殖,其基因组表达特性与在灰飞虱体内相似。
2、筛选有抑制RSV活性的天然植物源提取物。通过MTT法确定各候选天然产物的安全浓度。安全浓度范围内,采用两种作用方式(1.先病毒侵染后施加产物,2.先施加产物后病毒侵染)分析天然产物对RSV的抑制作用。结果显示,在RSV进入细胞后,各候选产物对病毒的复制增殖没有明显的抑制作用;天然产物ZLNT、ZCh、ZCu、ZE、ZM对RSV侵入昆虫细胞过程有明显的抑制作用,抑制率均高于60%,表现出阻止病毒侵入的抗病毒保护作用。
3、天然产物ZLNT在细胞水平对RSV的抑制特性。对ZLNT作进一步分析,明确ZLNT对RSV侵入细胞的抑制效果与浓度成正相关。200μg/mL浓度处理细胞,接种病毒3h后,对病毒侵入的抑制率高达90%,抑制效果最好,IC50为29.85μg/mL。另外,ZLNT对RSV有直接灭活作用,但直接灭活作用效果弱于阻止病毒侵入作用。
4、ZLNT在灰飞虱中对RSV的抑制作用。饲喂无毒灰飞虱ZLNT后进行饲毒试验,结果显示ZLNT处理灰飞虱后,其获毒率和病毒含量显著低于对照组,说明ZLNT可抑制RSV侵染中肠细胞进入虫体。饲喂带毒灰飞虱ZLNT,6d后检测,发现ZLNT试验组中灰飞虱体内病毒基因和蛋白表达量与对照组无显著差异,说明ZLNT对RSV进入虫体后的复制没有明显的抑制作用。ZLNT在灰飞虱体内对病毒的作用效果与细胞水平的作用效果基本一致。
本论文研究结果为开发抑制灰飞虱传毒的生物源药剂、寻找防控水稻条纹叶枯病的新途径提供了参考和理论依据。