口腔癌是头颈部常见的恶性肿瘤，而口腔鳞癌约占口腔癌的80％。口腔癌一旦出现颈淋巴转移，将严重影响患者的预后，这已为许多学者所共识，但有关癌淋巴转移的分子机理尚未完全明了。该领域一直以来是肿瘤研究的热点与难点，也是攻克恶性肿瘤的一个主要障碍。因此有关口腔癌颈淋巴转移机理的阐明，将为治疗口腔癌，提高口腔癌的治愈率，降低复发率提供坚实的理论基础，具有十分深远的临床应用价值。 研究表明，恶性肿瘤转移是一个复杂的过程，主要有以下几个步骤组成：①溶解基底膜侵入周围组织；②溶解淋巴管壁进入淋巴管；③在淋巴管内运行至淋巴结；④在淋巴结内定植生成转移灶。每个步骤都由许多基因共同参与调节，其中最主要的是肿瘤细胞溶解癌巢基底膜与淋巴管壁，进入增生的淋巴管内，其中基质金属蛋白酶-2是肿瘤细胞的主要基质蛋白溶解酶。根据新近研究淋巴管增生最相关的基因与血管内皮生长因子C有关，但有关该方面的研究还存在诸多不同的观点，争论较多，更缺乏全面系统的研究。且目前有关癌淋巴微转移的研究主要集中在乳腺癌与消化道肿瘤中，在口腔 口腔 淋巴管生成、基质全回蛋白醇2与颈淋巴 移的相关性研究 癌的淋巴微转移方面尚未见报道。本研究将淋巴转移的标准定位在以细胞角 蛋白为标志的微转移上，而不是以常规病理切片作为癌转移的标谁，来阑明 微转移相关的分子机理，将使转移相关基因的研究更具科学性和说服力，这 对掌握肿瘤转移的规律，了解肿瘤转移相关影响因素，控制与治疗口腔癌转 移奠定理论基础，具有十分重要的临床意义。0 本课题分三个方面进行研究： 第一部分 口腔鳞癌癌周淋巴管生成的相关分子机理研究 为了阐明口腔鳞癌癌周淋巴管生成的相关分子机理，本研究取15例 正常口腔粘膜组织、47例口腔鳞癌新鲜组织及 6例舌癌细胞株 Teasll3裸 鼠移植瘤组织，作成5卜m厚的冰冻切片，以酶组织化学方法检测淋巴管内 皮细胞上5’－核昔酸酶（5’－nucleohdase 5’NA）的表达，获得正常组织与鳞 癌组织的微淋巴管密度（加cmlymphak——sd咖njVM LVLVD）；再以逆转 录聚合酶链反应法（RTPCR）测定正常口腔粘膜组织、口腔鳞癌新鲜组织 及舌癌细胞株Tcasll3的血管内皮生长因子－C（VascularEndothelialGrowth Factor C VEGFC）基因、、血管内皮生长因于－C受体（VEGFR3lflt－4）基 因、诱导型一氧化氮合成酶（Induced Nitride oalde ssnthesizase iNOS）基 因mRNA表达。分析这三个基因mRNA表达水平与淋巴管密度的相关性， 及VEGFC与lM基因，oOS基因之间的相关关系，以阐明VEGFAI、fit4、．iNOS基因在癌周淋巴管生成中的地位与作用。 结果显示，口腔鳞癌癌周淋巴管密度为14．04士6．92，显著高于正常对叼 照组5．48士2石2（P＜0．0（）），癌周淋巴管主要表现为闭合的或开放的淋巴管； 舌癌细胞株Tcasll3裸鼠移植瘤组织癌周淋巴管密度为4．02士0．86，与裸鼠 －3－ 口 淋巴管生成、墓质全厄蛋自酶2与颈淋巴槽转移的用夫性研究 正常对照组2．83土0．44相比无显著性差异；口腔鳞癌VEGAI、iM、iNOS ’’1．－－er三者的表达率分别为 57．4％、61．7％、及 68．l％，显著高于正常对照 组：舌癌细胞株TCasll3未检到VEGPAI、lMInRNA的表达，但有iNOS mRN的表达。发现VEOFAI、fit4、iNOS阳性组中MLVD分别为1738 士4．4、1734士4．69、16．53士4．97均分别显著高于阴性组的9．54士379、8．72 士2．99、8．74士3．98，表明 VEGFAI、it－4、oOS mRNA表达与淋巴管密度 之间有正相关关系；且 VEGFAI、lM、iNOS InRN三者之间的表达亦具 有相关性。 以上结果表明，VEGFAI、iM、eOS基因在癌周淋巴管生成中具有重 要的作用与地位。VEGFAI、fit4、iNOS的表达增高通过自分泌或旁分泌的 作用刺激癌组织周围新的淋巴管生成，为癌细胞的淋巴转移提供病理学的基 础。癌周淋巴管增生的分子信息通道可能为肿瘤细胞分泌VEGFC刺激淋 巴管内皮细胞fit4受体表达增高，继而引起淋巴管内皮细胞内eOS表达升 高，NO产生增多导致内皮细胞增生，最终引起淋巴管密度增高。这些基因 表达的增高是癌周淋巴?