降酚菌分离、降酚基因定位及大肠杆菌表达的研究

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本文从焦化废水处理厂的活性污泥中筛选高效降酚菌。选择降酚效果最好的菌株进行基因定位,提取其降解质粒将其转入大肠杆菌进行表达。取得较好的研究结果。具体如下:1.取活性污泥进行驯化培养,分离到5株有效菌株,通过4-氨基安替比林直接分光光度法分析比较这5株菌降酚效果,确定其中降酚效果最好的H菌为研究对象。2.对高效降酚菌H株进行质粒提取,结果菌具有3个质粒,且质粒片段较大最大的超过10kb,最小的2kb左右。3.对H菌进行降酚基因的定位分析。通过SDS和原生质体再生法分别对H菌进行质粒消除,结果发现质粒去除的菌株降酚能力也随之消失。所以初步将H菌的降酚基因定位在质粒上。4.提取H菌的质粒将其转入大肠杆菌进行表达,获得了转化子。5.对转化子进行降酚效果测试,结果发现转化子获得了较好的降酚效果12h可达77.34%,但转化子的降解速率较小,这可能与转化子所含的质粒拷贝数有关。并证明转化子内含有与H菌株相同特性的质粒。实验得到具有降酚能力的大肠杆菌表达体系,为污染物降解的生物技术应用打下了良好基础,具有重要理论与实践意义。
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