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本文研究了中药杜仲中木脂素苷类活性成分——松脂醇二葡萄糖苷(PDG)和丁香脂素二葡萄糖苷(SDG)的提取、纯化及测定方法。并对杜仲提取液的抗高血压作用作了初步的探索。
(1)松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂素二葡萄糖苷的提取。系统地研究了溶剂提取法、半仿生提取法从杜仲中提取木脂素苷类化合物PDG和SDG,对这两种方法的提取效果进行了对比,确定了PDG和SDG最佳提取工艺——半仿生提取条件为:第一煎浸提液pH值7,第二煎浸提液pH值9,提取温度70℃,提取时间1.5 h,1h,乙醇浓度65%。在该条件下进行3次平行验证实验,测得PDG、SDG平均得率分别为0.612%,0.214%。优于单因素实验得率(PDG0.499%,SDG O.134%)。
(2)松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂素二葡萄糖苷的纯化。采用8000r/min下高速离心15min去除不溶性杂质,95%乙醇醇沉法去除杜仲多糖物质,溶剂萃取法除去杜仲胶,用天然澄清剂ZTCl+l-Ⅱ—S-8大孔树脂联用吸附纯化木脂素苷类化合物。最后采用硅胶柱色谱法分离木脂素苷类纯化后产品,得到PDG和SDG单体,纯度分别为90.86%,91.73%。
(3)松脂醇二葡萄糖苷和丁香脂素二葡萄糖苷的纯度测定和结构鉴定。采用HPLC-DAD对杜仲提取液和分离纯化中间产物进行定性定量分析。通过实验确定分析条件为:色谱柱,VP—ODS RP.18柱(150mm×4.6ram,预柱10mmx4.6mm);流动相,甲醇.水(30:70);流速,lmL/min;柱温25℃;进样量10μL;检测波长227nm。PDG进样浓度在30.8~154.0μg/mL之间,SDG的进样浓度在26.4~88.0μg/mL之间时,线性关系良好;平均回收率分别为99.8%,98.6%。采用薄层色谱(TLC)对所得两种单体做了初步定性分析,对其理化性质进行了研究,采用紫外光谱(UV)、核磁共振(NMR)等分析方法确定从杜仲中分离得到的2个化合物的结构,分别鉴定为PDG和SDG。
(4)动物实验表明,除达到最大效应的时间外,最大降压效应、最大降压百分比及作用维持时间在不同剂量组间存在显著性差异。静脉注射杜仲提取物可致SHR大鼠血压下降,这种降压作用呈剂量依赖性。