本研究对已有的一套腺病毒系统——Adeasy系统(包括骨架载体pAdeasy-1和转运载体pShuttle或pShttle-CMV)进行分析，选择两个合适的酶切位点ClaI和AscI用于高通量克隆。由于pAdeasy-1上含有两个AscI位点，因此在第一阶段的研究中首先对pAdeasy-133.4kb进行定点诱变，消除两个AscI位点，得到pmAdeasy。第二阶段的研究主要是：设计一个多核苷酸接头，其两端分别引进一个ClaI和AscI酶切位点，中间接一个荧光蛋白egfp基因，将此接头引入到pShuttle-CMV上，产物线性化后与pmAdeasy在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组得到最终目标载体pAd-Ace。该载体线性化后，在腺病毒包装细胞系(HEK293细胞)中通过转染、感染实验成功验证。通过pAd-Ace系统构建重组腺病毒的整个操作流程简单、快捷。只需在扩增目标基因一对PCR引物的5端分别引入5CGA3和5CGCGA3这样3～5个核苷酸，PCR扩增得到的产物经过T4DNA聚合酶处理后，直接定向克隆到载体上，只需一步克隆过程就能得到重组腺病毒质粒。质粒线性化后，转染HEK293细胞即可获得重组腺病毒。本研究通过pAd-Ace系统表达了一系列原核、真核基因及cDNA序列。同时还针对不同的实验目的，对pAd-Ace进行修饰，产生了一系列高通量衍生载体，包括： 　　①荧光蛋白示踪载体。 　　②带有荧光蛋白基因以及蛋白纯化标签His6的表达载体。 　　③带有两个克隆单元，用于双基因表达的载体。 　　本研究提供了一种新的构建重组腺病毒的技术，真正能做到高通量，直接、定向克隆表达，且不需依赖转运载体；不需昂贵的稀有酶；无需任何同源重组过程；也不需要费时费力的多轮空斑纯化，就能方便迅速地构建重组腺病毒。