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目的骨痹舒片是治疗类风湿性关节炎的中成药。主要含有制马钱子、制何首乌、桑寄生、黄芪等中药成分。制马钱子是骨痹舒片中君药之一，制马钱子中马钱子碱和士的宁既是有效成分又是毒性成分，为了保证骨痹舒片质量可控，临床用药安全、有效，建立骨痹舒片中马钱子碱和士的宁的含量测定方法；进一步建立两种成分在生物样品中的测定分析方法，研究马钱子碱和士的宁在复方制剂中的药动学过程，了解处方因素对制马钱子粉的影响，实验以制马钱子粉、热痹清片作为对照，为临床合理用药以及马钱子碱和士的宁在体内的代谢研究提供一定的参考依据。方法1.骨痹舒片中马钱子碱和士的宁含量测定方法的建立。以马钱子碱和士的宁的含量作为指标，考察提取溶剂、提取方法、提取时间等供试品制备条件；进一步对HPLC方法学进行考察，建立测定骨痹舒片中马钱子碱和士的宁的含量测定方法。2.生物样品中马钱子碱和士的宁含量测定方法的建立。生物样品的制备采用液液萃取法以及高速离心方式进行分离纯化。以峰面积为指标，对三氯甲烷、甲基叔丁醚、正己烷-二氯甲烷-异丙醇三种提取溶剂进行考察，并进一步考察萃取溶剂用量、萃取次数等条件。质谱-色谱条件的建立，以盐酸克伦特罗为内标，以峰面积值和离子强度为评价指标，建立质谱分析方法；通过对流动相pH值、流动相各组分的比例等参数的优化和方法学考察，建立色谱分析方法。3.研究骨痹舒片及马钱子粉在大鼠体内的药代动力学过程。采用大鼠灌胃给药及断尾取血的方式，通过UPLC-MS-MS法测定马钱子碱和士的宁含量，建立药代动力学模型，探讨含相同剂量马钱子碱和士的宁的骨痹舒片、热痹清片和制马钱子粉在大鼠体内的吸收代谢规律及其差异。结果1.建立HPLC法测定骨痹舒片中马钱子碱和士的宁含量测定的方法。样品制备采用碱性三氯甲烷为溶剂，超声提取60min。色谱柱为Agilent C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇25%∶缓冲液（水∶乙酸∶三乙胺=230∶2.4∶0.3）75%，流速1.0mL/min，检测波长254nm，柱温25℃，进样量10μL。马钱子碱在0.0948～1.1376μg（r2=1）、士的宁在0.1208～1.4496μg（r2=0.9999）范围内线性良好。平均回收率马钱子碱为97.37%，RSD为1.26%；士的宁为99.01%，RSD为0.91%。2.建立超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法（UPLC-MS-MS）测定生物样品中马钱子碱和士的宁含量测定。生物样品的制备采用甲基叔丁基醚液液萃取法以及高速离心方式进行分离纯化。以盐酸克伦特罗为内标，质谱条件：离子化方式：电喷雾（ESI），离子极性：positive(+)，工作参数：Capillary(KV)3.50，Extractor(V)4.00，Source Temperature(℃)110， DesolvationTemperature(℃)300， Cone Voltage GasFlow(L/Hr)50，Desolvation Gas Flow(L/Hr)300，Gas Cell Pirani Pressure (mbar)3.26e-3；色谱条件：色谱柱为Agela Technologies Venusil ASB C18柱，流动相为乙腈：0.15%甲酸溶液（40：60），柱温35℃，流速0.1mL/min，进样量5μL。在生物样品中马钱子碱的线性范围0.074～19ng/mL（r2=0.991171）、士的宁的线性范围0.198～50.75ng/mL （r2=0.996467）。马钱子碱和士的宁的平均回收率分别为87.25%和87.76%，RSD分别为7.29%和8.54%；平均基质效应为93.48%和95.51%，RSD分别为5.87%和6.24%。3.大鼠口服灌胃给予相同含量的马钱子碱和士的宁的骨痹舒片、热痹清片与制马钱子粉，经测定分析三种样品中马钱子碱和士的宁在大鼠体内的药代动力学过程均为二房室模型。骨痹舒片中马钱子碱和士的宁的达峰时间分别为27.5min和37.5min，达峰浓度分别为5.467ng/mL和22.483ng/mL，CL/F分别为4205.938L/min/kg和654.955L/min/kg，AUC(0-∞)分别为973.58ng/L·min和4526.795ng/L·min，Ka分别为0.068min-1和0.046min-1，t1/2ka分别为14.726min和9.285min，t1/2β为285.299min和385.394min，t1/2α为25.849min和45.958min；制马钱子粉中马钱子碱和士的宁的达峰时间分别为40min和42.5min，达峰浓度分别为4.667ng/mL和15.9ng/mL；CL/F分别为86.991L/min/kg和49.042L/min/kg，AUC(0-∞)分别为759.734ng/L·min和2135.14ng/L·min，Ka分别为0.235min-1和0.063min-1，t1/2ka分别为5.681min和9.285min，t1/2β为306.33min和385.394min，t1/2α为74.974min和45.958min。结论1.本实验建立同时测定马钱子碱和士的宁高效液相色谱的定量分析方法，该方法简单、快捷、提取完全，结果准确可靠，可作为骨痹舒片中马钱子碱和士的宁含量测定的方法。2.本实验为进一步研究骨痹舒片在体内的吸收、代谢过程，建立UPLC-MS-MS测定生物样品中马钱子碱和士的宁的含量测定。本方法灵敏度高、选择性强、分析时间短，适用于大鼠血浆中马钱子碱和士的宁的浓度测定。生物样品前处理采用甲基叔丁基醚液液萃取，以盐酸克伦特罗为内标，采用高速离心的方式进行纯化，所得的生物样品不仅纯净无干扰，而且提取率达到80%以上，符合生物样品测定的要求。3.药代动力学实验结果表明，骨痹舒片、热痹清片及制马钱子粉中的马钱子碱和士的宁在大鼠体内均符合药动学二房室模型，三者在大鼠体内具有快吸收、快消除的药动学特征。骨痹舒片与热痹清片中马钱子碱和士的宁的生物利用度、消除速度均显著高于制马钱子粉。