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DNA疫苗在机体内的分布和安全性是研究者们普遍关注的问题。本研究为IBV DNA疫苗及脂质体在DNA疫苗中的应用提供了科学依据。 为研究本实验室构建的禽传染性支气管炎病毒(IBV)真核表达质粒pIBVS1、pIBVM、pIBVN混合DNA疫苗及DNA疫苗-脂质体复合物在鸡体内的组织分布和安全性,DNA疫苗经腿部肌肉分点免疫接种7日龄非免疫健康雏鸡,DNA疫苗-脂质体复合物经腿部肌肉及滴鼻、点眼两种免疫途径接种相同日龄的非免疫健康雏鸡,利用PCR方法对疫苗在鸡体内的分布及与鸡细胞基因组的整合进行检测研究。并通过肌肉注射和滴鼻、点眼两种途径对1日龄雏鸡免疫接种DNA疫苗-脂质体复合物;相同剂量连续免疫接种7日龄雏鸡以及5倍常规使用剂量(超大剂量)免疫接种7日龄雏鸡,来对DNA疫苗-脂质体复合物进行免疫毒性实验研究。实验期间对实验鸡进行一般临床表现观察,并分别在免疫后48h和30日龄进行血液学、血液生化学、病理及病理组织学检测。 分布实验结果表明:肌注DNA疫苗、肌注及滴鼻、点眼免疫接种的DNA疫苗-脂质体复合物均于免疫接种后24h,在血液和所有检测的组织中检测到质粒pIBVS1,pIBVM,pIBVN的分布,并能持续分布90d;在免疫后120d,疫苗免疫各组在血液中均已检测不到三种质粒的分布,各组织器官中均检测不到质粒pIBVS1的分布,DNA疫苗组仅在心脏、肺脏、肾脏、胸腺及注射部位肌肉检测到质粒pIBVM,pIBVN的分布,DNA疫苗-脂质体复合物肌肉注射组仅在心脏、脾脏、肺脏、肾脏及注射部位肌肉检测到质粒pIBVM,pIBVN的分布,而DNA疫苗-脂质体复合物滴鼻、点眼免疫组除了在心脏和肝脏中检测不到质粒DNA的分布外,其余组织中均能检测到质粒pIBVM,pIBVN的分布。 安全性实验表明:纯化后的组织基因组DNA经PCR扩增均呈阴性,未发现整合现象。试验期间,各组动物行为活动未见异常,无死亡。免疫后48h,单剂量肌肉注射及滴鼻、点眼免疫组的红细胞(RBC)数量,红细胞压积(HCT)与对照组相比差异显著(P<0.05),血红蛋白(HGB)含量与对照组相比差异极显著(P<0.01),但都属于正常波动范围内,恢复期间各组血液学指标与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。免疫后48h,超大剂量组总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量与对照组相比差异极显著(P<0.01),其余各组血液生化指标与对照组相比均无显著性差异(P>0.05),恢复期间,所有疫苗免疫组血液生化指标均与对照组无显著性差异(P>0.05),超大剂量接种可能因剂量偏高,在免疫初期对雏鸡肝脏的蛋白质合成功能造成影响,但后期得以修复。病理剖解无异常变化,各疫