脱落酸和蛋白质可逆磷酸化试剂处理对葡萄、苹果果实糖代谢酶活性的效应

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脱落酸(Abscisic acid,ABA)是一种具有重要生理功能的植物激素。许多研究表明ABA在果实成熟中起到重要作用,同化物分配也受到ABA的调控。本研究的目的是为了探索ABA的作用机制。首先通过使用不同浓度的ABA对果实圆片进行活体温育,测定各种糖代谢酶的活性变化,从而确定ABA是否对葡萄、苹果果实中糖代谢酶的活性具有调节作用。研究证明20μmol/L的ABA可明显地激活葡萄和苹果果实中可溶性酸性转化酶活性。 为了研究ABA激活效应的发生机制以及在ABA诱导的信号转导途径中是否有蛋白可逆磷酸化反应的参与,进一步探索了以下几方面内容:1、用(±)-ABA和(-)-ABA分别以最适激活浓度(20μmol/L)处理果实圆片。发现(-)-ABA对果实中可溶性酸性转化酶活性无明显的激活作用,从而证实自然活性形式的(+)-ABA是果实成熟发育过程中起重要作用的因素。2、用多种蛋白激酶和蛋白磷酸酶抑制剂处理果实圆片,其作用效果复杂,并未表现明显的一致性。说明在ABA激活糖代谢酶活性的信号传递中可能有多个蛋白激酶或蛋白磷酸酶参与,相互作用,连锁反应。3、用蛋白质合成抑制剂环己亚胺和mRNA转录抑制剂放线菌素D处理果实圆片,对葡萄、苹果果实中酸性转化酶均有影响,但结果不尽相同。在葡萄果实中,酸性转化酶活性被抑制,可能是由于ABA的诱导效应是在mRNA转录和翻译水平上进行的。而在苹果果实中,加入核酸和蛋白质合成抑制剂,反而增强了ABA对苹果果实圆片酸性转化酶活性的激活效应。4、在果实的酶粗提液中进行酸性磷酸酶和碱性磷酸酶处理。发现仅就酸性转化酶来讲,酸性磷酸酶的作用条件与其相符,在葡萄、苹果果实粗提酶液中加入酸性磷酸酶的实验中,该酶对酸性转化酶活性有激活作用。而碱性磷酸酶由于反应缓冲环境与酸性转化酶差异较大,对于酸性转化酶的脱磷酸化反应不适用。
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