【摘 要】
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目的观察经皮穿刺导入630nm激光对血卟啉衍生物诱导的肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤影响,为间质光动力治疗提供临床理论依据。方法成功构造出24只肺腺癌A549细胞裸鼠的皮下移植瘤模型并随机分成4组,等到皮下移植瘤生长到平均体积为250-300mm3按照以下要求分别作相应处理,空白对照组（不作任何处理）、单纯光敏剂组（瘤内注射光敏剂但无630nm激光照射）、单纯光照组（经皮穿刺630nm激光照射但不注
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目的观察经皮穿刺导入630nm激光对血卟啉衍生物诱导的肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤影响,为间质光动力治疗提供临床理论依据。方法成功构造出24只肺腺癌A549细胞裸鼠的皮下移植瘤模型并随机分成4组,等到皮下移植瘤生长到平均体积为250-300mm3按照以下要求分别作相应处理,空白对照组（不作任何处理）、单纯光敏剂组（瘤内注射光敏剂但无630nm激光照射）、单纯光照组（经皮穿刺630nm激光照射但不注射光敏剂）、HPD-PDT组（瘤内注射光敏剂并经皮穿刺630nm激光照射）。光敏剂注射方式选择以10mg/kg的剂量向肿瘤的三个方向注射到肿瘤中后避免光照4个小时。光纤导入采用30ml注射器针头插入至光纤前端,经皮穿刺治疗时要调整光纤前端与针尖之间的距离,保证瘤体被光斑完全覆盖;将激光器功率维持在100m W/cm2,每次照射5分钟,间隔1分钟,间断照射15分钟,每2天照射一次,总共照射3次。经皮穿刺光动力治疗2周后处死荷瘤裸鼠,获得后的瘤体组织进行后续实验。（1）记录瘤体长径和短径并计算移植瘤的体积;绘制肿瘤生长曲线图,比较各组移植瘤体积的生长变化情况;（2）计算抑瘤率,绘制抑瘤率曲线,比较各组肿瘤生长抑制情况;（3）经HE染色移植瘤组织切片,观察各组肿瘤细胞及细胞间质等病理形态改变,通过观察肿瘤细胞坏死情况评价瘤体组织的损伤程度;（4）经TUNEL染色移植瘤组织切片,观察移植瘤内凋亡情况,并计算各组的凋亡指数;（5）RT-q PCR（实时荧光定量PCR）检测移植瘤组织中VEGF、HIF-1α以及BAX的mRNA相对表达水平;（6）通过Western blot（免疫印迹法）检测VEGF、HIF-1α及BAX的蛋白表达水平。结果（1）空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组三组的移植瘤生长速度较前无明显改变,肿瘤生长明显;HPD-PDT组肿瘤生长速度明显变慢,肿瘤体积减小。（2）空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组及HPD-PDT组肿瘤体积的抑瘤率分别0、3.4%、8.7%、40.6%;相较于其他组,HPD-PDT组的抑瘤率明显增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）经HE染色后,空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组三组镜下可见较多数量的肿瘤细胞,排列紧密,核大深染;HPD-PDT组镜下可见肿瘤细胞出现不同程度的坏死,细胞数量明显减少,细胞排列紊乱;（4）TUNEL染色后HPD-PDT组的阳性凋亡细胞明显增多,凋亡现象最为明显;各组细胞凋亡指数分别为:4%、6%、8.7%和35%,相较于其他三组HPD-PDT组凋亡指数的差异具有统计学意义（P<0.05）,空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组三组的凋亡指数组间均无统计学差异（P>0.05）。（5）RT-PCR法检测结果显示,相较于空白对照组、单纯光敏剂组和单纯光照组,HPD-PDT组BAX的mRNA表达量相对增多,而VEGF和HIF-1α的mRNA表达量明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）,空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组三组组间均无统计学差异（P>0.05）。（6）Western blots法检测结果显示,相较于空白对照组、单纯光敏剂组和单纯光照组,HPD-PDT组的BAX蛋白表达水平明显升高,VEGF、HIF-1α的蛋白表达水平下降,差异具有统计学意义（P<0.05）,空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组三组组间均无统计学差异（P>0.05）。结论经皮穿刺导入630nm激光对血卟啉衍生物诱导的肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,提示了间质光动力治疗对肺癌治疗的有效性;可以诱导肿瘤细胞的凋亡,其机制与上调BAX基因表达有关;且能使HIF-α和VEGF基因表达水平下降,说明光动力治疗可以抑制新生血管因子的形成。
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