肠胃清抗肝癌细胞侵袭转移的研究

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目的:研究肠胃清方对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其抗肝癌侵袭转移作用可能的机制。   方法:本研究共分为:空白对照组及各浓度肠胃清药物血清。1.采用MTT比色法测定肠胃清药物血清对人肝癌细胞的生长抑制作用;2.黏附实验检测肠胃清对肝癌细胞黏附能力的影响;3.Transwell小室法检测肠胃清方对肝癌细胞侵袭运动能力的影响;4.Real-time PCR方法测定肠胃清方对肝癌细胞侵袭转移相关因子MMP-9及VEGF的mRNA表达的影响;5.Elisa检测肠胃清方对肝癌细胞侵袭转移相关因子MMP-9及VEGF蛋白表达的影响。   结果:1.肠胃清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制率分别为:2.5%药物血清组作用肝癌SMMC-7721细胞24h,48h,72h后的增殖抑制率分别为9.63±2.12%,20.32±3.12%,25.92±4.45%;5%药物血清组:12.59±4.22%,34.63±7.48%,40.20±8.36%,7.5%药物血清组:21.43±5.77%,30.83±6.43%,36.41±6.55%;10%药物血清组:28.63±7.06%,38.98±4.33%,34.56±4.73%;2.粘附实验表明:肠胃清各浓度药物血清可降低细胞的黏附能力,且具有统计学意义(P<0.01),各组两两比较具有统计学差异即:中、高剂量组与低剂量组比较、高剂量与中剂量组比较均有统计学差异(P<0.01),呈浓度依赖性;3.肠胃清作用肝癌细胞24h后,运动及侵袭实验结果表明:与对照组相比,肠胃清各组可明显减少穿膜细胞数(P<0.01),各组两两比较具有统计学差异即:中、高剂量组与低剂量组比较、高剂量与中剂量组比较均有统计学差异(P<0.01),呈浓度依赖性;4.肠胃清作用人肝癌SMMC-7721细胞24h后,与对照组相比可明显下调MMP-9mRNA的表达(P<0.05),且高剂量组与低剂量,中剂量组与低剂量组相比有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,低剂量可降低VEGFmRNA的表达,但无统计学意义(P>0.05),而中剂量及高剂量分别与对照组相比具有统计学差异(P<0.05);5.肠胃清可以使得培养液上清中VEGF蛋白表达量下降,与对照组相比,作用24h后,除低剂量组外,中、高剂量组与对照组相比有统计学意义(P<0.05),且中剂量组与高剂量组比较有统计学差异(P<0.05);用肠胃清处理48小时后,培养液上清中VEGF表达含量下降,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),各组两两比较具有统计学差异;然而肠胃清作用细胞24、48h后,均可下调其MMP-9的蛋白表达量,与对照组相比有统计学差异,各组两两之间比较均有统计学差异(P<0.05)。   结论:1.肠胃清可体外抑制人肝癌细胞的生长增殖能力,呈时效和量效关系。2.肠胃清可在体外抑制人肝癌细胞侵袭、运动及黏附等生物学行为,发挥其抗侵袭转移的作用。3.肠胃清可下调VEGF,MMP-9的表达,可能是其抗肝癌细胞侵袭转移的重要机制之一。
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