MUC1-2VNTR基因修饰的DC对骨髓瘤细胞的体外杀伤效应的研究

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目的:通过体外杀伤实验,研究转染粘蛋白核心肽MUC1-2VNTR(两串联)基因的树突细胞(DC)诱导的细胞毒T细胞(CTL)对人的多发性骨髓瘤细胞株(U266)的诱导杀伤效应,为研制多发生性骨髓瘤基因疫苗奠定基础。方法:1、根据靶基因设计,将MUC1-2VNTR的编码基因作为目的基因,将人工合成的全基因克隆入载体pcDNA3.1/myc-hisA中。2、用去内毒素质粒小提试剂盒扩增、提取质粒、并保存。3、选取健康人的外周血单个核细胞,体外由重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)诱导成熟的DC细胞。4、构建pcDNA3.1-2VNTR重组质粒后,采用Lipofectimine脂质体介导法转染DC细胞(DC-2VNTR),以转染空载体质粒pcDNA3.1 (DC-pcDNA3.1)及lipofctamine处理的DC (DC-Lipo)作为对照组。5、Western印迹法检测重组体在DC细胞内的表达。6、在体外刺激同源T细胞,细胞毒实验检测DC-2VNTR诱导的CTL对多发性骨髓瘤细胞株(U266)的杀伤作用。结果:1.成功构建了重组质粒载体pcDNA3.1-2VNTR/myc-hisA;2.人的外周血DC细胞的培养和鉴定;3. Western印迹法检测到MUC1-2VNTR在DC细胞内的表达;4.DC-2VNTR诱导的CTL对多发性骨髓瘤细胞(U266)有显著杀伤效应,且显著高于DC-pcDNA3.1组及DC-Lipo组(P<0.05)。结论:以MUC1-2VNTR基因转染的DC可以诱导CTL反应,并能特异地杀伤U266多发性骨髓瘤细胞株。
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