牛胰腺脱氧核糖核酸酶I是最早在1950年由Kuntiz等从牛胰腺中分离结晶的,在蛋白质化学和酶学史上占据着重要的作用。牛胰腺脱氧核糖核酸酶I是研究的比较透彻的脱氧核糖核酸酶I型酶。研究表明其参与很多重要的生理过程,如为体内核苷酸的补救合成途径提供寡核苷酸,在细胞凋亡过程中降解DNA,参与肌动蛋白的组装等。目前制备Bp-DNase Ⅰ的一般方法是直接从牛的胰腺组织中分离提取或是在大肠杆菌中表达。前一种方法步骤多,操作复杂,耗时长,在提取的过程中活性容易丧失,不适合大规模制备。后一种方法诱导时间不能太长,一旦该酶在宿主细胞中积累到一定量时就会降解DNA,宿主的生长量受到很大的制约。虽然有报道该酶也可以在COS-1细胞中实现表达,但是这种方法比较适合实验室阶段的研究应用,并且COS-1细胞培养无菌操作严格、成本高,也不是大量制备Bp-DNase Ⅰ的好方法。因此,本文旨在利用毕赤酵母系统建立一套节能、环保、高效、均相制备Bp-DNase Ⅰ的方法,为其功能活性研究提供基础。本文利用overlapping PCR方法,按照毕赤酵母密码子偏爱性合成了Bp-DNase Ⅰ基因并在毕赤酵母GS115中实现了分泌表达。研究表明该酶在摇瓶中的表达量为223.9mg／L,酶活力为23000U／mg,比报道的高23倍。酶学性质研究表明,该酶最适pH为7.9,最适作用温度为37℃。该酶具有较高的pH稳定性,在pH5-9处理10min后仍有80%的残余活性。通过Endo H处理检测可知该酶在毕赤酵母表达过程中发生了N-糖基化修饰,这可能是该酶热稳定下降的原因。以上结果表明利用毕赤酵母表达系统可实现Bp-DNase Ⅰ的分泌表达,且此法较传统制备方法更高效、节能。