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石斛属是兰科第一大属,全球约有1600多种。其中多数种具观赏价值,称为石斛兰,既可作盆花又可作切花,为四大观赏兰之一,具有极高的观赏价值和经济价值。本研究以铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl)为材料,应用基因枪法进行了遗传转化研究,旨在将抗旱、耐脱水基因lea3导入石斛兰,改良兰花品质,培育耐旱、耐脱水兰花新品种,提高盆栽兰花的耐旱性,延长兰花切花的瓶插期。研究结果如下:在暗处对铁皮石斛类原球茎进行了驯化培养,确定类原球茎的快速增殖期为3~5周,继代周期为35天,分化取材时间为28天,转化受体取材时间为25天。通过不同条件的比较研究,获得了植株分化体系。苗分化的优化条件是:MS+NAA 0.9mg/L+6-BA 1.0mg/L+蔗糖3%+琼脂粉5.5g/L,类原球茎分化不定芽高达56.50个/g(为对照的27.29倍)。根分化优化条件是:MS+20%香蕉泥+蔗糖3%+琼脂粉5.5g/L,再生芽生根率高达95%,每苗平均根条数达5.05条。考察了基因枪法遗传转化铁皮石斛的有关影响因素,确定的参数为:轰击前,类原球茎光照预分化培养10天,轰击后过渡培养20天,轰击次数为每皿1次;确定的筛选条件为:转化的类原球茎PPT筛选压力为3mg/L,筛选2个月,转化的再生不定芽PPT筛选压为20mg/L,筛选1个月。获得了转lea3基因植株:轰击后的类原球茎恢复培养20天,经3mg/L PPT筛选两个月,转入不含PPT的高效分化培养基分化45天,获得的再生芽再经20mg/L PPT筛选一个月,然后转入高效生根壮苗培养基培养40天,获得转化再生植株35株;对其进行除草剂叶片涂抹检测,获得了11株具PPT抗性的转化再生植株,经PCR检测,其中7株扩增出了目的基因片断,证实lea3已整合到铁皮石斛基因组中。