肠道病毒71型(enterovirus type71，EV71)自1974年首次报道以来，其感染已在全世界引起多次暴发与流行，是全世界关注的严重公共卫生问题之一。但是，目前还没有特效防治EV71的方法，存在的关键问题在于EV71基因组较小，易发生突变，限制了靶向病毒的抗病毒药物的发展。研究表明，抑制宿主细胞中某些蛋白的功能可以抵抗病毒感染。与病毒基因组相比，人类基因组序列中可能包括更多与病毒复制有关的基因。一些研究报道发现抑制这些与EV71复制相关的宿主基因的表达可阻断EV71病毒的感染。本课题旨在利用生物信息学方法筛选宿主细胞内潜在的以及基于EV71自身基因组的抗EV71药物作用靶标，利用反义寡核苷酸技术进行体外和体内筛选和验证，旨在为新型抗病毒药物的筛选奠定基础。本研究结合抗EV71的人的基因表达谱（编号GSE16358）和人蛋白相互作用网络数据库（HPRD），利用子网辨识的方法设计了一个含100多个节点的核心子网，然后选择拓扑上的重要节点，利用生物信息学分析方法筛选出基因CDK1、 PIN1、CSNK2A2、CSNK2B、VIM、MAPK3、PRNP、YWHA2、CREBBP、KHDRBS1、ESR1、MAPK8可能成为人横纹肌瘤细胞(Rhabdomyosarcoma，RD)内潜在的抗EV71药物作用靶标，利用Antisense design对这些基因进行设计，通过与GeneBank联机blast序列比对获得了理论上靶向上述基因的反义寡核苷酸ASODNs（Antisense oligonucleotides）各五条。同时，利用生物信息学方法针对EV71病毒基因组也设计了EV1、EV2、EV3、EV4、EV5五条反义寡核苷酸序列，并对其进行筛选与验证。针对以上筛选出的有效序列，通过CPE（Cytopathologetic ettect）检测、荧光定量PCR、Western印迹技术等检测其在RD细胞模型和EV71感染小鼠模型中对EV71复制的影响。通过筛选和初步验证发现靶向EV71自身的反义序列EV5以及靶向CDK1的ASODNs在体内外具有良好的抗EV71病毒活性，可能被发展成为新型抗EV71病毒药物。同时发现CDK1、CSNK2A2与EV71病毒的感染和复制密切相关，可能成为抗EV71药物的新型作用靶点。由于多靶点联合治疗已逐渐成为抗EV71病毒治疗中的热点，我们在前期工作的基础上将筛选出的抗EV71感染效果较好的反义药物进行联合用药，从而筛选出组合作用较好的联合用药组，为临床联合抗病毒治疗提供了新的思路和依据，为严重危害人类健康的EV71病毒的治疗提供参考价值。