【摘 要】
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目的:子宫内膜炎是一种常见的母畜繁殖障碍性疾病。一般由于其炎性产物及细菌毒素对精子产生危害,使受精卵着床受阻或胚胎早期死亡,临床上表现为母畜屡配不孕或孕期流产。子宫内膜炎是母畜不孕症的重要原因之一且发病机理复杂,在当今社会奶制品和肉制品消耗量大且需求量还在扩大的条件下,子宫内膜炎致使母畜胎次间隔增大,产奶量下降,淘汰率增加,大大的影响母畜的生产性能,这给养殖业带来了直接的经济损失。血管生成素样蛋白
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目的:子宫内膜炎是一种常见的母畜繁殖障碍性疾病。一般由于其炎性产物及细菌毒素对精子产生危害,使受精卵着床受阻或胚胎早期死亡,临床上表现为母畜屡配不孕或孕期流产。子宫内膜炎是母畜不孕症的重要原因之一且发病机理复杂,在当今社会奶制品和肉制品消耗量大且需求量还在扩大的条件下,子宫内膜炎致使母畜胎次间隔增大,产奶量下降,淘汰率增加,大大的影响母畜的生产性能,这给养殖业带来了直接的经济损失。血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）是Kim等人在2000年发现并命名的一类新型的功能类似于血管生成素的分泌性糖蛋白。国内外的研究表明ANGPTL4与炎症有着密切的关系,是重要的促炎因子。但是目前的研究并没有表明ANGPTL4是否与子宫内膜炎有关,因此本研究通过建立小鼠子宫内膜炎模型,检测子宫内膜炎小鼠中ANGPTL4的mRNA及蛋白的表达水平变化,并检测子宫内膜炎小鼠中炎症通路基因缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和核因子p65（NF-κBp65）mRNA的表达变化,从而探讨ANGPTL4与子宫内膜炎的关系及其炎症通路,也为子宫内膜炎的预防和治疗提供新的思路。方法:实验一:选取24只8周龄昆明系小鼠随机分为四组,采用子宫灌注的方式分别向小鼠子宫注射生理盐水、1 mg/mL、3 mg/mL、5 mg/mL脂多糖（LPS）各50μL建立子宫内膜炎模型,通过临床观察和剖检,制作组织病理切片及HE染色验证造模是否成功。根据石蜡切片镜检结果选取1 mg/mL浓度的LPS作为最适浓度进行后续实验。实验二:选取20只8周龄昆明系小鼠随机分为两组,分别对两组小鼠子宫灌注生理盐水和1 mg/mL脂多糖（LPS）各50μL,于灌注24 h后收集小鼠子宫,观察两组小鼠临床表现、子宫剖检分析子宫组织病理学的变化,并通过荧光定量PCR技术检测两组小鼠子宫中ANGPTL4 mRNA的表达水平,并采用免疫印迹法（Western blotting）检测小鼠子宫中ANGPTL4蛋白的表达水平。实验三:实验分组同实验二,分别对两组小鼠子宫灌注50μL生理盐水和50μL 1mg/mL LPS于24 h后收集小鼠子宫,采用荧光相对定量PCR技术,通过2（-△△Ct）法检测生理盐水组和1 mg/mL脂多糖组小鼠子宫中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）、ANGPTL4以及HIF-1α和NF-κBp65的mRNA表达水平。结果:实验一结果:子宫灌注24 h之后可观察到,生理盐水组小鼠精神、食欲、反应能力正常无变化,剖检可见子宫大小正常,组织切片可见子宫内膜完整;1 mg/mL脂多糖组小鼠精神沉郁、食欲下降、被毛粗乱、腹泻、体重及反应能力下降,触摸腹部有明显抵抗;剖检肉眼可见子宫红肿;组织切片染色镜检可见子宫内膜脱落、不完整,并观察到大量嗜中性粒细胞聚集;3 mg/mL脂多糖组小鼠精神高度沉郁、食欲减退、严重腹泻、消瘦、基本上无正常的反应能力,剖检可见子宫肿胀明显,组织切片可见子宫内膜严重破碎呈雪花状碎片;5 mg/mL脂多糖组小鼠死亡,剖检子宫肿胀,组织切片可见子宫内膜严重脱落。实验二结果:子宫灌注24 h之后可观察到,生理盐水组小鼠精神、食欲、反应能力无明显变化,剖检可见子宫大小、颜色正常,组织切片可见子宫内膜完整;1 mg/mL脂多糖组小鼠精神沉郁、食欲下降、饮水增加、腹泻、反应能力下降,触摸腹部有明显抵抗;剖检肉眼可见子宫红肿;荧光相对定量PCR结果,与空白组相比,1 mg/mL LPS组小鼠子宫中ANGPTL4 mRNA表达明显升高（P＜0.05）;免疫印迹（Western blotting）结果,与空白组相比,1 mg/mL LPS组小鼠子宫中ANGPTL4蛋白表达水平极显著升高（p＜0.001）。实验三结果:荧光相对定量PCR结果,与空白组相比,1 mg/mL LPS组小鼠子宫中IL-6 mRNA、TNF-αmRNA和ANGPTL4 mRNA表达的表达均显著升高（P＜0.01）;HIF-1αmRNA的表达升高（P＜0.05）;NF-κBP65 mRNA的表达极显著升高（P＜0.001）。结论:本研究结果表明,小鼠子宫内膜炎中ANGPTL4表达上调可能与小鼠子宫内膜的炎症相关;子宫内膜炎小鼠中通路基因HIF-1α和NF-κBP65的表达上调可能与ANGPTL4表达上调有关。
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