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杆状病毒是一类具有囊膜的包裹的双链环状DNA病毒,在自然界中以节肢动物作为宿主进行广泛的感染和传播。其天然宿主大部分是农林业害虫。我们在前期测定棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,简称HearNPV)基因组序列及HearNPV的ODV与BV比较蛋白质组学研究基础上,全面开展了HearNPV基因功能的研究。本论文利用λ-Red细菌重组系统对HearNPV中的两个结构蛋白基因:ha68和odv-e25(orf82)进行了基因缺失的重组病毒构建和功能检测,初步探究了这两个囊膜蛋白在杆状病毒复制过程中的功能。 本论文共分三章。 第一章:引言。引言第一部分简要介绍了杆状病毒的分类、病毒粒子的形态结构及病毒的感染复制机理,着重梳理了杆状病毒基因功能的研究现状和进展;第二部分是对同源线性重组原理系统介绍。第三部分,介绍了本文研究的两个基因ha68和odv-e25的同源基因的研究进展和背景; 第二章:HearNPV结构蛋白基因ha68功能的初步研究。棉铃虫核多角体病毒HearNPV的HA68蛋白被证明是BV囊膜的组成成分,我们对表达该蛋白的基因ha68开展了功能研究。在HearNPV的bacmid(HaBacHz8)的基础上通过λ-Red细菌内重组系统及杆状病毒Bac-to-Bac系统,构建出ha68基因缺失的重组病毒及拯救型带有egfp基因的重组病毒:vHabac-ha68KO-polh、vHaBac-ha68RE-polh。通过转染-感染实验及一步生长曲线的绘制,证明ha68基因缺失的重组病毒的感染性有一定程度降低,同时电镜观察并未见到缺失型的重组病毒在形态学上与拯救型和野生型有明显差异,三种病毒均能产生形态正常的核衣壳,提示杆状病毒核衣壳的组装不受基因ha68缺失的影响。 第三章:HearNPV结构蛋白基因基因odv-e25功能的研究。棉铃虫核多角体病毒HearNPV的ODV-E25蛋白被证明是既是BV囊膜的组成成分又是ODV囊膜的组成成分,我们对表达该蛋白的基因odv-e25开展了功能研究。在HearNPV的bacmid(HaBacHz8)的基础上通过λ-Red细菌内重组系统及杆状病毒Bac-to-Bac系统,构建出odv-e25全基因缺失及插入缺失的带有egfp基因的重组病毒基因组HaBac-e25O-polh、HaBac-e25KI-polh和HaBac-e25RE-polh。通过转染-感染实验发现,缺失odv-e25基因的重组病毒不能生产有感染性的子代病毒。