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近年米,食品安全问题,尤其是动物性产品中兽药残留超标的问题,引起了全世界的普遍关注,发展灵敏高、速度快、价格低的药物残留检测技术是保障食品安全的关键之一。传统的仪器分析方法前处理过程复杂、仪器昂贵、效率低下,不能适应以筛选为目的人量检测样本的分析,免疫分析方法具备灵敏度高、特异性高、方便和成本低等优点,越米越多的应用到兽药残留检测。
本文以荧光素异硫氰酸钠(fluorescein isothiocyanate,FITC)和二氯三嗪基氨基荧光素(dichlorotriazinylaminofluorescein,DTAF)标记磺胺类药物(Salfonamides,SAs)和马杜霉素(Maduramicin,MD),得到荧光标记药物。首次系统研究了荧光偏振免疫分析(Fluorescence Polarization Immunoassay,FPIA)检测动物性产品中SAs和MD的残留。同时制备了喹诺酮类(Fluoroquinolones,FQs)药物的单克隆抗体(Monoclonal antibody,Mab),建立了可以同时检测12种FQs的多残留ELISA方法。
以磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine,SMZ)的多抗(Polyclonal antibody,Pab)和单抗建立了SMZ的FPIA检测方法。多抗的IC<,50>为41 ng mL<-1>;单抗得到的灵敏度较高IC<,50>为16 ng mL<-1>,添加空白鸡肉平均回收率为76-89%,批间变异系数为7.4-9.6%;建立了同时检测牛奶中磺胺甲氧吡嗪(Sulfamethoxypyridazine,SMP)和磺胺氯吡嗪(Sulfachloropyridazine,SCP)残留的FPIA方法,对SMP和SCP的IC<,50>分别为11.5和29 ngmL<-1>,检测系统可以耐受20%的甲醇存在,在pH值4-8利低盐离子浓度环境中均能得剑较好的灵敏度,牛奶样本中的SMP残留和SCP残留的平均同收率为60-145%,平均变异系数为8.6-12.8%;建立了同时检测蜂蜜和鸡肉中磺胺甲基嘧啶(Sufamerazine,SMR)、SMZ和磺胺嘧啶(Sulfadiazine,SDZ)残留的FPIA方法,IC<,50>分别为19、65.7和137 ng mL<-1>,添加空白蜂蜜和鸡肉样本的平均同收率为89-131%,平均变异系数在10%左右:建立了鸡肉、鸡蛋和鸡脂肪中MD残留的FPlA检测方法, IC<,50>为160 ng mL<-1>,添加空白鸡肉、鸡蛋和鸡脂肪平均同收率为82-130%,变异系数为7-15.5%。
建立了5种动物性产品12种FQs多残留的ELISA检测方法,以单抗C4A9H1建立的ELISA方法对12种FQs的交义反应率在35-100%之间,在MRLs水平下至少可以检测12种FQs。建立的ELISA方法应用到鸡肉、鸡肝脏、虾、蜂蜜和鸡蛋5种样本中12种FQs的残留检测,平均同收率为60.2-92.5%,变异系数为5.6-16.5%。
本文通过计算17种SAs的最低能量构象,研究了SMZ多抗和SMR单抗对17种SAs亲和力的构效关系(Structure Activity Relationship,SAR)。结果表明,水合能和Log P值在SAs与SMZ抗体结合的过程中发挥重要作用。应用比较分子立场分析方法(Comparism Molecular Field Analysis,CoMFA)求出了8种SAs与SMR单抗的定量构效关系(Quantitative Structure Activity Relationship,QSAR),得剑的交义验证相关平方系数q<2>为0.634,由最佳主成分验证得剑的结果r<2>为1,即计算值与实验值完全一致。构建了14种FQs分子的三维立体结构利静电荷分布图,讨论了FQs的分子结构与单抗C4A9H1对FQs亲和力的关系,应用 CoMFA算法计算山FQs分子与抗体亲和力之间的QSAR,r<2>为0.999,q<2>为0.866。首次证明抗体与抗原之间存在精确的QSAR关系。