克隆化及分析小鼠胸腺树突状细胞和基因转染法建立小鼠胸腺基质细胞系

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通过有限稀释法将本室所建BALB/C小鼠胸腺树突状细胞系MTSC4进行细胞克隆,获14个克隆,分别命名为4(1)-4(14),克隆效率达40%.克隆细胞呈接触性抑制生长,倍增时长短不同,4(12)最短,为16小时,4(3)最长,为38小时.IL-6分泌水平不一,4(4)、4(5)分别高达386u/ml和300u/ml,而4(8)则仅有13u/ml.趋化因子活性也不同,4(5)的趋化指数为13.6,而4(10)、4(12)、4(13)、4(14)无趋化活性.各克隆抗数突状细胞mAb染色均为阳性,Ia抗原强弱不一,角蛋白、MHCI类抗原均为阴性.用两种重组质粒pSHPV-18(即人乳头瘤病毒18型全基因组DNA经EcoRI酶切位点连入pSV2<,neo>质粒中)和ZIP-mT(即小鼠多瘤病毒mT基因经BamHI位点连入pZIP<,neo>质粒中)分别转染BALB/C小鼠早期胸腺基质细胞,采用的方法为脂质体介导的转染方法.经几周的G418筛选,获得多个具不同形态的细胞克隆,分别命名为H系列(HPV-18转染所得克隆)和m系列(mT转染所得克隆).各克隆均能耐受800ug/ml的G418筛选压力.m系列的m42、m43、m21、m51、m52倍增时间分为23小时、22小时、17小时、26小时和36小时,H系列的H1、H4、H221倍增时间分别为29小时、24小时和29小时.m42、m52、H4、H221的MHCⅡ类抗原及pf183均为阳性.上述四个克隆除H221外角蛋白均为阴性,IL-6活性分别为1395u/ml、413u/ml、449u/ml和508u/ml.检测m42和H4的染色体数目,m42为39±1.5,H4为42.1±1.5.Southern杂交检测m21、m42、m51染色体DNA发现有目的基因mT的整合.
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