【摘 要】
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论文以沙地云杉成熟合子胚为材料,研究了沙地云杉体细胞胚胎发生过程中的生理生化变化,着重探讨了多胺在体胚发生中的作用机理。1.首先对沙地云杉体细胞胚发生系统的优化培养
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论文以沙地云杉成熟合子胚为材料,研究了沙地云杉体细胞胚胎发生过程中的生理生化变化,着重探讨了多胺在体胚发生中的作用机理。1.首先对沙地云杉体细胞胚发生系统的优化培养条件进行了研究表明:诱导初始愈伤组织的最佳培养基为;SH +2,4-D(0.1㎎/L)+6-BA(0.1㎎/L);分化胚性愈伤组织的最佳培养基为; LS+ABA(5.0mg/L)+PEG4000(50.0g/L)加入50.0g/LPEG4000可改善胚性愈伤组织的质量,诱导出的胚性愈伤组织黄绿色、色泽亮丽、松散、颗粒状、大小均匀一致。胚性愈伤组织诱导周期为60d,第50d左右需继代扩繁。2.沙地云杉胚性愈伤组织体细胞胚胎发生过程中,SOD酶活性较高,而POD活性较低。附加外源Put促进体细胞胚发生过程中POD酶活性上升,SOD酶活性降低。附加多胺抑制剂时鱼雷胚时期的SOD酶活性较高,随着胚的成熟SOD酶活性逐渐下降,而POD酶活性一直保持上升状态。3.体细胞胚胎发生初期(多细胞原胚时期)及成熟阶段(球形胚、心形胚、鱼雷胚及子叶胚时期)内源PA含量不同;附加30mg/L的外源Put可以提高内源PA的含量,促进球形胚的发生。特别是对内源Put和Spm的影响较大。附加外源Put后球形胚时期内源PA含量明显增加,但体细胞胚成熟阶段内源PA含量下降。维持较高水平的Put/Spd和Put/Spm是细胞柄团前期发育所需要的,但不利于体细胞胚成熟。4.CHA和MGBG 2种抑制剂处理的结果基本相似。单独附加加抑制剂(CHA或MGBG)时,只对内源Spd有抑制作用,增加内源Spm和Put含量;多胺抑制剂和外源Put同时处理时,明显降低内源Spm和Put含量。因而判断了抑制剂(CHA或MGBG)和Put同时处理时才对内源Spm和Put含量起到抑制作用。单独附加抑制剂(CHA或MGBG)时,是通过抑制内源Spd而降低总多胺含量。
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