[目的l临床研究部分通过补肾除湿方组与硫酸氨基葡萄糖胶囊联合双氯芬酸钠缓释片组相对比,分别于治疗前后观察两组组内和组间血清中,白细胞介素—1β(IL-1 β)、肿瘤坏死因子—α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平及VAS、WOMAC、Lequesne评分,分析其治疗膝骨关节炎的有效性及安全性。实验研究部分通过建立人软骨细胞凋亡模型,采用补肾除湿方含药血清干预,以进一步探讨补肾除湿方对软骨细胞凋亡的干预作用和PI3K/Akt信号通路的影响。[方法]临床研究:纳入早期KOA患者共40例,运用随机数字表法,根据患者就诊时间编号,将入选病例分为试验组及对照组,各20例。试验组予补肾除湿方水煎剂口服,对照组予氨基葡萄糖联合双氯芬酸钠口服,共服药4周。分别于治疗前后进行VAS、WOMAC、Lequesne评分,以及采集血液并检测血液样本中IL—1、TNF—α及MMP—3水平。实验研究:(1)C28/I2人软骨细胞的培养与传代。(2)取生长良好的C28/I2人软骨细胞,随机分为7组,即空白组、模型组、10%空白血清组、IL-1 β+10%空白血清组、IL-1 β+50含药血清组、IL-1 β+10%含药血清组、IL-1β+20%含药血清组,各组IL-1 β浓度均为10ng/mL,含药血清的浓度分别为5%、10%、20%,于干预24h、48h、72h后,采用CCK-8法测定0D值,从而确定补肾除湿方含药血清对IL-1 β诱导的C28/I2人软骨细胞凋亡模型的最佳干预浓度及时间。(3)选取生长良好的C28/I2人软骨细胞,随机分为5组,即空白组、模型组(IL-1β浓度为10ng/mL)、10%空白血清组、IL-1β+10%空白血清组、IL-1 β+含药血清组(IL-1 β浓度为10ng/m L、含药血清浓度为CCK-8法确定的最佳浓度),干预一定时间后(CCK-8法确定的最佳时间)收集细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率。Western-blot法检测各组软骨细胞Bax、Caspase-9、Akt的蛋白表达情况。[结果]临床部分:试验组及对照组在年龄、性别、病程方面均无统计学差异(p>0.05),治疗前的 WOMAC、VAS、Lequesne、IL-1β、TNF-α、MMP-3 均无统计学差异(p>0.05),治疗后组间VAS评分、Lequesne评分及IL-β、MMP-3组间对比差异有统计学意义(p<0.05),W0MAC评分及TNF-α对比差异无统计学意义。两组治疗前后自身对比,WOMAC、VAS、Lequesne评分、IL-1β、TNF-α、MMP-3差异具有统计学意义(p<0.05)。实验研究:(1)软骨细胞生长良好,按1:2-1:3传代培养。(2)采用CCK-8法确定10%含药血清为对IL—1 β诱导的C28/I2人软骨细胞凋亡模型的最佳干预浓度,最佳干预时间为48h。(3)各组软骨细胞凋亡率:1L-1β组高于空白组(P<0.05),IIL-1 β+10%含药血清组低于IL-1 β组和1L-1 β+10%空白血清组(P<0.05)。(4)各组软骨细胞干预48小时后Bax、Caspase—9及Akt蛋白表达:Bax、Caspase-9表达,IL-1 β组明显高于空白组(P<0.05),IL-1 β+10%含药血清组低于IL-1 β组和IL-1β+10%空白血清组(P<0.05);Akt表达,IL-1 β组低于空白组(P<0.05),IL-1β+10%含药血清组高于IL-1 β组和1L-1 β+空白血清组(P<0.05)。[结论]临床研究:本研究表明补肾除湿方治疗早期膝骨关节炎在止痛,改善膝关节功能,改善关节僵硬不适及降低IL-1水平方面较阳性对照药物效果更好。实验研究:(1)白细胞介素可构建C28/I2人软骨细胞凋亡模型,导致Akt信号通路被抑制,促凋亡因子Bax及Caspase-9过表达,这可能是软骨细胞凋亡的机制。(2)补肾除湿方含药血清可以抑制C28/I2人软骨细胞凋亡,对Akt信号通路、Bax及Caspase-9的表达进行调控,这可能是补肾除湿方抑制软骨细胞凋亡、治疗本病的机制。