论文部分内容阅读
本研究利用MRS培养基从泡菜汁中筛选出一株乳杆菌PCL，乳酸纸层析实验证明了该菌株产乳酸。该菌呈革兰氏阳性，细胞为短杆状。对该菌株进行了16S rDNA的测序，发现其与Lactobacillus plantarum strain p215的同源性达到99％。其发酵液的兔红细胞凝集试验发现它能够分泌凝集素样蛋白到MRS培养液中。对培养液离心、上清液浓缩、去除乳酸，进而通过蛋白质分离纯化手段中的凝胶层析、离子交换层析等操作，纯化出了该菌的凝集素样蛋白，尿素-SDS-PAGE实验显示出蛋白质染色的单一条带，分子量85kDa。通过对L．plantarum PCL凝集素样蛋白的部分性质进行研究，结果如下：1．L．plantarum PCL凝集素样蛋白的浓度为0.068mg／mL时，凝集兔红细胞的活力为28，最低凝集浓度为0.265μg／mL。2．温度不影响L．plantarum PCL凝集素样蛋白的凝集活性，从30℃到沸水浴处理30min，其凝集活性不变。3．多种单糖不抑制L．plantarumPCL凝集素样蛋白的凝集活性，如D（+）-Glucose（葡萄糖）、D（+）-Galactose（半乳糖）、L-（+）-Arabinose（阿拉伯糖）、D-Xylose（木糖）、D-Sorbitol（山梨醇）、L-（-）-Sorbose（山梨糖）、D（+）-Mannose（甘露糖）、α-L-Rhamnose Monohydrate（鼠李糖）、D-（-）-Fructose（果糖）等，Dextrose（无水右旋葡萄糖），D-（-）-Arabinose（阿拉伯糖）2种单糖在一定程度上可以促进样品的凝集活性。4．pH对L．plantarum PCL凝集素样蛋白凝集活性的影响因使用的缓冲液不同而略有不同。磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液在酸性环境下，显示出一定的抑制性；Na2HPO4-KH2PO4（1／15mol／L）缓冲液在碱性环境下具有较小的促进作用，Na2CO3-NaHCO3（0.1mol／L）缓冲液在强碱性环境下不影响L．plantarum PCL凝集素样蛋白的凝集活性。5．Mn2+、Ca2+、Mg2+、K+四种金属离子不影响L．plantarumPCL凝集素样蛋白的凝集活性，6．10％（V／V）的甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、苯甲醇、乙酸乙酯、异丙醇、乙二醇以及1％β-巯基乙醇（V／V）等有机溶液不影响L．plantarum PCL凝集素样蛋白的凝集活性，正丁醇、异戊醇在一定程度上有促进作用。7．L．plantarum PCL凝集素样蛋白在激发波长308nm下获得荧光光谱的特征荧光峰，峰值位于380nm附近，且荧光强度较大，则L．plantarum PCL凝集素样蛋白富含色氨酸残基。推测该凝集素样蛋白像胶原蛋白一样具有某种特殊的蛋白结构。8．L．plantarum PCL凝集素样蛋白与其它凝集素的性质进行比较，其特征为耐受高温，有很高的凝集活力、较宽的pH适应性，Ca2+、Mg2+、多数单糖均不影响其凝集活性。9．利用MTT法检测L．plantarumPCL凝集素样蛋白对HIV的体外抑制效果，发现HIV-1IHB诱导C8166细胞合胞体形成的EC50为0.079μg／mL，TI值为28.34。10．将L．plantarum PCL凝集素样蛋白与其它凝集素的抗HIV活性进行比较，发现L．plantarum PCL凝集素样蛋白与CA、EHA相近，且远远高于其它几种凝集素，表明L．plantarum PCL凝集素样蛋白对HIV有着较好的抑制作用，值得进一步研究。