复合神经诱导管的构建及其在外周缺损神经再生中的应用研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lixiaoliangtony
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目的:筛选神经生长因子(NGF)微球保护剂和包封材料,制备含活性药物较高、释放时间较长的NGF微球;构建复合神经生长因子微球的诱导管,并研究诱导管对大鼠坐骨神经缺损修复的促进作用。方法:复乳-溶剂挥发法(W/O/W)制备保护剂为聚乙二醇(PEG)、卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)和葡萄糖(Glu)的NGF微球,溶剂挥发法(S/O/W)制备不同粘度的聚乳酸羟基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)包封的NGF微球;NGF含量采用ELISSA法测定,释放液中NGF活性采用PC12细胞测定;溶剂挥发法制备含不同量添加剂的PLA导管,构建复合神经生长因子微球诱导管三种:诱导管A(PLA管内加10mg微球),诱导管B(PLA管外加微球10mg)和诱导管C(PLA管内加微球5mg),复合诱导管修复大鼠左侧坐骨神经10mm的缺损,评价再生情况,选择最佳复合NGF微球诱导管;选定的复合微球诱导管进行大鼠坐骨神经缺损的研究,实验分组:A自体神经移植组,B复合微球组,C复合生理盐水组,D复合NGF溶液组,术后15天观察各组的神经再生长度和神经纤维再生数量,HE染色观察再生神经结构,对神经早期的修复情况进行评价。结果:萃取法提取微球中的NGF,平均回收率为81.3%±6.2%,精密度为4.32%;ELISSA法测定NGF含量,标准曲线为y=0.0054x+0.1067,r=0.9908,检测范围为3.9~250pg/ml。PC12细胞法测定释放液中NGF的活性,轴突细胞百分率与NGF活性浓度间的标准曲线方程为y=0.005x3-0.2612x2+5.1218x+14.20,r=0.9957,测定范围为NGF 1~30ng/ml。卵清蛋白可以较好的保护微球中的NGF活性,PLA∶PLGA(1∶1)混合物包封的微球体外释药时间较长。目的微球的平均粒径25μm左右,包封率为29.72%,载药量为0.003%。药物突释率为12.7%,90天药物释放60%,微球体外释放符合Higuchi释药方程M=91.836+17.413t1/2,r=0.9934;微球中NGF活性10天内基本稳定,活性存留率在80%以上,10天后下降较快,28天时活性存留率约40%左右,至90天时活性降至10%以下,活性NGF释放亦符合Higuchi释药模型,释药方程为M=92.577+8.989t1/2,r=0.9915。添加剂含量为15%时,PLA导管的机械性和通透性较好;复合诱导管C(PLA管内加微球5mg)既可保持导管通畅,又可促进神经再生,可以作为神经缺损修复研究的复合微球诱导管;神经缺损修复15天后,各组神经再生距离分别为:自体神经移植组9.2±1.66mm,复合微球诱导管组3.5±132mm,复合生理盐水组1.55±1.03mm;复合NGF溶液组1.9±1.14mm,复合微球诱导管组与其他组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示复合微球诱导管组和自体神经移植组的再生神经组织结构较好。结论:以卵清蛋白为保护剂、以PLA∶PLGA(1∶1)为包封材料的NGF微球体外性质评价达到设计要求。所构建的复合NGF微球诱导管可明显促进神经缺损的早期修复,加快神经再生速度,增加再生神经纤维的数量,修复效果优于复合生理盐水组和复合NGF溶液组,比自体神经组略差。
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