在未分化的人骨髓间充质干细胞内鉴定调节Nanog基因表达的顺式调控元件

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骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,骨髓MSCs)具有自我扩增和多向分化潜能,具有易分离、扩增快以及体外操作简便等特点,使其在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域具有十分广阔的应用前景。目前对骨髓MSCs生长调节机理研究的很少,很有必要深入研究骨髓MSCs的自我更新机制。本论文试图鉴定调节Nanog基因表达的顺式调控元件,并且研究关键转录因子Oct4和Sox2在调节Nanog基因表达中的作用。双荧光报告素酶实验表明,在未分化的人骨髓MSCs中,Nanog基因片段(自-380bp至+24bp)能够被激活,能够活化报告基因萤火虫荧光素酶的表达,但在由骨髓MSCs诱导分化的成骨细胞中,此Nanog基因片段不能被激活。另外,将含有绿色荧光蛋白报告基因的质粒转染入细胞内后,在未分化的人骨髓MSCs中,此Nanog基因片段能够活化绿色荧光蛋白的表达。这些研究结果表明此Nanog基因片段(自-380bp至+24bp)含有顺式调控元件,能够在未分化的人骨髓MSCs中被激活。RT-PCR研究表明,未分化的人骨髓MSCs能够表达Oct4基因,并且能够表达少量Sox2,但由骨髓MSCs诱导分化的成骨细胞不能表达Oct4和Sox2。上述Nanog基因片段(自-380bp至+24bp)含有可与转录因子Oct4和Sox2结合的核苷酸顺序,凝胶迁移实验显示,在未分化的人骨髓MSCs中,转录因子Oct4和Sox2不能够与此核苷酸顺序结合,说明虽然Oct4和Sox2基因能够在未分化的人骨髓MSCs内表达,转录因子Oct4和Sox2可能不能在此细胞内调节Nanog基因的表达。在未分化的胚胎干细胞(embryonic stem cells)中,Oct4和Sox2对Nanog基因的表达起到重要作用,此研究表明,与胚胎干细胞不同,Oct4和Sox2在未分化的人骨髓MSCs内不能够活化Nanog基因,其他的未知转录因子可能能够活化Nanog基因的表达。本实验的结果具有重要的理论和应用价值,为进一步研究人骨髓MSCs的自我更新及分化机制提供了依据,不但有利于促进MSCs生长,也有利于控制MSCs的定向分化,有利于将MSCs应用于组织工程。
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