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恩诺沙星是1987年由德国拜耳公司最先研制合成的广谱抗菌药,我国由广东海康兽药厂于1992年合成成功。它抗菌谱广,抗菌效果好,目前在畜牧业及水产养殖中应用非常广泛,也是我国农业部批准的动物专用抗菌药。本研究建立了鱼组织中氟喹诺酮类药物多残留的高效液相色谱(HPLC)检测方法,进而对恩诺沙星在鲫鱼体内的消除进行研究,并通过恩诺沙星对鲫鱼的急性毒性试验,对其毒性做出科学评价。
建立了鱼肉中环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星四种氟喹诺酮类药物的高效液相色谱检测方法。样品采用磷酸二氢钾缓冲液(pH7.4)提取,C18固相萃取柱净化,流动相洗脱。色谱分析采用Inertsil ODS-3(4.6×250mm)色谱柱,流动相为(0.05M柠檬酸+0.1M乙酸铵):乙腈(80:20,V:V)。荧光检测器λex=280nm,λem=450nm。四种氟喹诺酮类药物在0.1~1000ng/mL浓度范围内,标准曲线线性良好,相关系数(R<2>)为0.9999。四种药物检测限(LOD)为0.6pμg/kg,定量限(LOQ)为2.0μg/kg。2、20、100μg/kg三个浓度的添加回收试验,回收率为75.8%~98.6%,批内变异系数0.41%~6.06%,批间变异系数4.09%~11.47%。方法准确、灵敏、可靠,符合残留分析的要求,并且具有经济、简便等优点。
对恩诺沙星在鲫鱼体内的消除规律进行研究。以5mg/kg剂量连续5天灌服给药,在第一次给药后的1h,3h,6h,12h,24h(给药一次),48h(给药两次),72h(给药三次),96h(给药四次)及停药后的3h,6h,12h,1d,2d,4d,7d,11d,20d,30d,40d,48d,59d,89d(给药五次)分别采集样品,样品经前处理后用高效液相色谱检测。结果显示,给药后1h,鲫鱼肌肉中即可检测出恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星,总浓度为1858.61μg/kg,3h恩诺沙星、环丙沙星浓度达到最大值2325.6(51.2+2274.4)μg/kg,之后浓度下降,直到下一次给药;给药期间,鲫鱼体内药物不断蓄积,并于停药后3h,药物浓度达到最大值6238μg/kg。药物消除符合一级动力学方程Y=5867.8e<-0.0131t>(μg/kg),R<2>=0.9982,消除半衰期T<,1/2>为52.9 h,药物消除非常缓慢,停药30d,药物浓度为96μg/kg(低于最高残留限量),停药89d,检测不出。