【摘 要】
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目的:探讨肝癌细胞中ADAR1是否参与干扰素抑制HBV作用。方法:1.通过不同浓度Ⅰ、Ⅱ型干扰素(IFN-α:0、200、500、1000、2000U/ml、IFN-β:0、200、1000U/ml、IFN-γ:0、200、1000U/ml)以及IFN-α不同处理时间(0、2、4、8、16h)作用HepG2肝癌细胞后Western blot和RT-qPCR检测ADAR1的表达情况。2.IFN-α作
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目的:探讨肝癌细胞中ADAR1是否参与干扰素抑制HBV作用。方法:1.通过不同浓度Ⅰ、Ⅱ型干扰素(IFN-α:0、200、500、1000、2000U/ml、IFN-β:0、200、1000U/ml、IFN-γ:0、200、1000U/ml)以及IFN-α不同处理时间(0、2、4、8、16h)作用HepG2肝癌细胞后Western blot和RT-qPCR检测ADAR1的表达情况。2.IFN-α作用于瞬时转染HBV复制质粒的Huh7肝癌细胞,通过Southern blot检测HBV复制中间体水平,ELISA法检测HBsAg水平。3.在Huh7细胞中干扰ADAR1的表达后瞬时转染HBV复制质粒,IFN-α作用后Western blot检测ADAR1的表达情况,Southern blot检测HBV复制中间体水平。4.通过转录组测序技术分析Huh7.5.1细胞中ADAR1敲除前后相关基因的表达并验证。结果:1.mRNA水平,IFN-α和IFN-β可以诱导ADAR1的表达,且IFN-α对ADAR1的表达具有浓度依赖性,而IFN-γ未对ADAR1 mRNA水平产生影响。2.蛋白水平,IFN-α和IFN-β可以诱导ADAR1(P110,P150)的表达,且IFN-α对ADAR1的表达具有时间依赖性。IFN-γ未对ADAR1蛋白表达产生影响。3.在Huh7细胞中,ADAR1参与IFN-α抑制HBV复制作用。4.基于RNA-seq数据,筛选出Huh7.5.1细胞中ADAR1敲除前后的差异表达基因2946个以及其相关信号通路并对所筛选的25个关键基因进行验证。结论:在肝癌细胞中,Ⅰ型干扰素诱导ADAR1的表达,并且ADAR1参与干扰素抑制HBV复制的过程。
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