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胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)是一种凶险的恶性肿瘤,发病率有逐年上升趋势,但由于胰腺为腹膜后器官早期病变不易被影像发现,加之其缺乏特异性临床表现和有效的血清检测指标,故临床上很难实现早期诊断。新近,病理学家提出胰腺上皮內瘤变(Pancreatic IntraepithelialNeoplasias,PanINs)和胰腺导管内乳头状粘液性肿瘤(Intraductal papillary mucinousneoplasms,IMPNs)是胰腺癌的癌前病变。许多学者分别从分子生物学、病理组织学的角度研究了PanINs和IPMNs的生物学特性,表明其为胰腺导管腺癌发生过程中的重要环节,因此深入研究PanINs和IPMNs至PDAC进展过程中的分子变化,将可能揭示胰腺癌发病的分子基础。近年来,针对基因表观遗传学的研究表明:DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰作用异常导致的基因组稳定性下降、抑癌基因功能丧失、原癌基因活性增高,在多种人体肿瘤形成中发挥重要作用。并且,启动子区DNA甲基化与组蛋白去乙酰化之间具有协同抑制基因转录的作用,有研究认为DNA甲基化是基因转录抑制程序的启动者,而乙酰化修饰是基因转录抑制的执行者。在真核生物中,DNA甲基化转移酶-1(DNA methylation transferase-1,DNMT1)是维持DNA甲基化的关键酶,其表达与基因印记、细胞的分化与发育、肿瘤形成等密切相关,而组蛋白去乙酰化酶-1(histone deacetylase-1,HDAC1)是乙酰化过程的关键酶,本研究通过免疫组化方法检测DNMT1和HDAC1蛋白在不同胰腺组织(正常、PanINs、IPMNs及PDAC)中的表达,进一步揭示DNA甲基化和组蛋白去乙酰化在胰腺肿瘤发生机制中的作用,为胰腺癌早期诊疗提供新线索。一、胰腺石蜡标本中PanINs、IPMNs的分级诊断目的:收集胰腺手术切除标本,结合PanINs、IPMNs和PDAC病理学诊断标准,找到足够的处于不同分级的PanINs、IPMNs和PDAC病变以进行下一步分子病理学研究。材料与方法:收集2005年4月至2007年10月期间长海医院胰腺手术切除标本共200例,尸解正常胰腺标本10例,制成石蜡标本;48例IPMNs石蜡标本来自长海医院病理科。切片后行H-E染色并进行分级诊断。结果:共发现正常胰腺导管20例,PanIN-1A 48例,PanIN-1B 103例,PanIN-299例,PanIN-3 30例,IPMA 18例,IPMB 10例,IPMC 20例,PDAC 54例。结论:在正常胰腺导管→PanIN—1A→PanIN一1B→PanIN-2→PanIN-3→PDAC及正常胰腺导管→IPMA→IPMB→IPMC→PDAC的逐级进展过程中胰腺组织异型程度逐渐增加,体现了胰腺癌的逐级进展过程。二、DNMT1蛋白在胰腺组织中的免疫组化检测目的:检测DNMT1蛋白在不同胰腺组织(正常、PanINs、IPMNs及PDAC)中的表达水平,分析其在胰腺癌发生中的作用,为胰腺癌的早期诊疗提供新线索。材料与方法:免疫组织化SP法检测DNMT1抗体在20例正常胰腺导管,48例PanIN-1A,103例PanIN-1B,99例PanIN-2,30例PanIN-3,18例IPMA,10例IPMB,20例IPMC及54例胰腺癌中的表达。结果:DNMT1阳性表达率在由正常胰腺导管→PanIN-1A→PanIN-1B→PanIN-2→PanIN-3→PDAC及正常胰腺导管→IPMA,IPMB→IPMC→PDAC的逐级进展过程中随组织异型程度增加而逐渐升高,差异有统计学意义。结论:DNMT1表达增强是胰腺癌发生的早期事件:DNMT1随组织异型程度增加其表达水平逐渐升高,提示其促进了胰腺癌的进展。三、HDAC1蛋白在胰腺组织中的免疫组化检测目的:检测HDAC1蛋白在不同胰腺组织(正常、PanINs、IPMNs及PDAC)中的表达水平,分析其在胰腺癌发生过程中的作用,为胰腺癌的早期诊疗提供新线索。材料与方法:免疫组织化SP法检测HDAC1抗体在20例正常导管,48例PanIN-1A,103例PanIN-1B,99例PanIN-2,30例PanIN-3,18例IPMA,10例IPMB,20例IPMC及54例胰腺癌中的表达。结果:HDAC1阳性表达率在由正常胰腺导管→PanIN-1A→PanIN-1B→PanIN-2→PanIN-3→PDAC及正常胰腺导管→IPMA,IPMB→IPMC→PDAC的逐级进展过程中随组织异型程度增加而逐渐升高,差异有统计学意义。结论:HDAC1表达增强是胰腺癌发生的早期事件;HDAC1随组织异型程度增加其表达水平逐渐升高,提示其促进了胰腺癌的进展。四、DNMT1和HDAC1在胰腺癌中的表达与临床病理特征之间的相关性分析目的:分析DNMT1和HDAC1在胰腺癌组织中的表达与临床病理特征之间的相关性,探讨其可能的生物学意义及预后判断价值。材料与方法:收集54例胰腺癌患者临床病例资料,主要包括患者年龄、性别、烟酒史、肿瘤大小、肿瘤部位、神经浸润、血管浸润、分化程度、增殖活性和TNM分期。随访54例患者并计算术后生存率。结果:DNMT1高表达与神经浸润、分化程度和TNM分期有关(P＜0.05),HDAC1高表达与增殖活度、肿瘤分化程度及TNM分期有关(P＜0.05)。DNMT1和HDAC1高表达组的术后总体生存率均小于其低表达组,差异有显著性。结论:DNMT1和HDAC1表达增强能够反映胰腺肿瘤的恶性生物学行为;DNMT1和HDAC1可作为胰腺癌的预后判断指标。五、小结本实验采用免疫组化方法检测DNA甲基化及组蛋白乙酰化修饰的关键酶DNMT1和HDAC1在不同胰腺组织(正常、PanINs、IPMNs和PDAC)中的表达,并分析了其与胰腺癌患者临床病理特征之间的相关性。结果发现:DNMT1和HDAC1阳性表达率在胰腺组织中随组织异型程度增加而增高;DNMT1表达与神经浸润、分化程度和TNM分期有关,HDAC1表达与增殖活度、肿瘤分化程度及TNM分期有关;DNMT1和HDAC1高表达均提示预后不良。提示:DNMT1和HDAC1表达增强是胰腺癌的早期事件,二者共同促进了胰腺癌的进展;DNMT1和HDAC1高表达反映了胰腺癌的恶性行为,二者可以作为胰腺癌的预后判断指标。