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目的研究宫颈癌中ALDH1作为CCSCs标志物的可能性,以及SP与ALDH1联合筛选CCSCs的可行性。研究方法1.利用流式分选技术获得宫颈癌Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞的ALDH1high和ALDH1low细胞。2.采用无血清悬浮培养实验观察ALDH1high和ALDH1low细胞的自我更新能力。3.采用软琼脂克隆实验验证ALDH1high和ALDH1low细胞的增殖能力。4.采用反转录-聚合酶链式反应(Real-Time PCR)技术检测宫颈癌原代细胞ALDH1high和ALDH1low细胞中相关干性基因表达情况。5.利用流式分选技术将宫颈癌原代细胞进行SP及ALDH1联合筛选,以判定两者分选出的细胞亚群间的相互关系。结果1.经流式分选技术检测,宫颈癌Si Ha细胞株中ALDH1high细胞比例为(0.77±0.25)%(n=6),宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞比例为(3.13±0.85)%(n=6)。2.无血清悬浮培养实验结果显示,Si Ha细胞株中ALDH1high细胞的成球率为(12.91±3.94)%,明显高于ALDH1low细胞的成球率(5.83±0.96)%,(n=4,P<0.05);宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞的成球率为(22.92±2.84)%,也明显高于ALDH1low细胞的成球率(8.33±4.90)%,(n=4,P<0.05)。3.软琼脂克隆形成实验结果显示,Si Ha细胞株中ALDH1high细胞的克隆形成数为(26.17±7.63)/200 cells,明显高于ALDH1low细胞的克隆形成数(12.83±2.56)/200 cells,(n=6,P<0.05);宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞的克隆形成数(55.00±8.67)/200 cells,也明显高于ALDH1low细胞的克隆形成数(23.67±3.93)/200 cells,(n=6,P<0.05)。4.Real-Time PCR检测宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞的CD24和CD44表达量分别是ALDH1low细胞的(2.23±0.33)倍和(1.87±0.12)倍(n=3,P<0.05);而ALDH1high细胞的Nanog及Oct4的表达分别是ALDH1low细胞的(1.41±0.27)倍和(1.49±0.20)倍,(n=3,P>0.05)。5.宫颈癌原代细胞的SP细胞中ALDH1high细胞的比例为0.75%,而NSP细胞中ALDH1high细胞比例为5.87%,SP和ALDH1high两个细胞亚群不重叠。结论1.Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞亚群自我更新及增殖能力均高于ALDH1low细胞亚群;2.Si Ha细胞株及宫颈癌原代细胞中ALDH1high细胞亚群中干性基因表达高于ALDH1low细胞亚群;3.ALDH1可富集CCSCs,但分离纯度不够,不能单独作为CCSCs分选的标志物;4.SP和ALDH1不能作为联合筛选CCSCs的方法。