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骨肉瘤大多发生在青少年,恶性程度高,在治疗方面,主要采取手术结合放化疗,但是由于化疗效果不明显,放疗并发症比较多,常常治疗后发生复发和转移,预后不佳。光动力疗法（photodynamic therapy,PDT）作为一种靶向性很强的局部治疗方法,已经广泛应用于各种肿瘤病变的治疗。它包括了局部或全身性注射光敏剂,随着光敏剂选择性地聚集于病变部位后使用适当波长（500-800nm）的可见光对病变的部位进行照射。在有氧分子（O2）存在的情况下,光敏剂在光照时可以诱发出一系列的光动力学反应（Ⅰ型反应和Ⅱ型反应）并且产生多种细胞毒性物质（比如单线态氧、活性氧簇）,诱导病变部位的细胞凋亡和坏死。血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）介导的光动力疗法（HMME-PDT）已广泛应用于食管癌、膀胱癌、乳腺癌等肿瘤治疗的基础及临床研究中,但目前HMME-PDT对骨肉瘤细胞作用的研究较少。目的:拟采用光敏剂血卟啉单甲醚结合波长为630nm的可见光照射,研究HMME-PDT对人骨肉瘤细胞MG-63细胞系的影响。方法:实验分组及PDT处理A实验组（HMME+照光）;B光敏剂对照组（单纯加HMME）;C激光对照组（单纯照光）;D空白对照组（不加HMME,不照光）。1.MTT法测定吸光值OD492、细胞存活率不同浓度（0、0.5、1、2、4、8μg/ml）的HMME与细胞孵育4h后,以不同能量激光（1.5、3、6、12J/cm2）照射,MTT比色法测定细胞的OD值及存活率。2.细胞形态学的观察不同浓度（1、2、4μg/ml）的HMME与细胞孵育4h后,以6J/cm2能量的可见光照射,光镜下观察PDT后细胞形态的变化。3.Annexin V/PI双染色流式细胞仪分析细胞死亡形式不同浓度（1、2、4μg/ml）的HMME与细胞孵育4h后,以6J/cm2能量的可见光照射,Annexin V/PI双染色流式细胞仪分析细胞死亡形式。4.流式细胞仪分析细胞周期变化不同浓度（1、2、4μg/ml）的HMME与细胞孵育4h后,以6J/cm2能量的可见光照射,流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果: 1.单纯的光照和单纯加光敏剂对MG-63细胞均无明显的杀伤作用。HMME为2μg/ml以下和光照能量在6J/cm2以下时基本无明显杀伤作用。HMME为2μg/ml光照能量为6J/cm2时,细胞在PDT处理后存活率明显降低,HMME为2μg/ml及光照能量为6J/cm2是PDT处理MG-63细胞的有效剂量。2.空白对照组细胞与正常培养的MG-63细胞形态学无差异,呈梭形或多角形生长,生长状态良好。PDT处理组细胞逐渐变圆,体积变小,核浆比增大,折光性减弱,贴壁能力下降,细胞间隙增大,直到细胞漂浮死亡。并且光敏剂为4μg/ml的孔内细胞经PDT后已经发现细胞核已明显固缩,胞浆接近全无。3.Annexin V-FITC/PI双染色以后,流式细胞仪分析结果显示,HMME-PDT处理后24h,绝大多数细胞为Annexin V（+）/PI（+）细胞,可能包括坏死或者晚期凋亡细胞,少部分为Annexin V（+）/PI（-）的早期凋亡细胞,极少部分细胞为Annexin V（-）/PI（+）的收集过程中损伤的细胞。4.经过HMME-PDT处理后的MG-63与空白对照组的细胞相比,G0G1期细胞百分比轻度降低,S期细胞百分比无明显变化,G2M期细胞百分比明显增高,并呈现出剂量依赖关系。结论:HMME-PDT对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的杀伤作用,其作用具有剂量和光照能量依赖性,HMME为2μg/ml及光照能量为6J/cm2是HMME-PDT处理MG-63细胞的有效剂量。HMME-PDT是通过诱导G2M期阻滞而使MG-63细胞发生凋亡。