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目的本研究中构建了大鼠脊髓损伤以及原代神经元凋亡、星形胶质细胞增殖模型,通过检测Sam68在蛋白质水平表达及其空间定位的变化来研究Sam68在脊髓损伤后参与神经元凋亡、星形胶质细胞增殖的可能机制,从而为脊髓损伤后的临床治疗提供新的药物靶点。方法首先构建大鼠脊髓损伤模型,通过Western Blot和免疫组化检测脊髓损伤后Sam68的表达变化;通过免疫荧光检测Sam68与神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞的共定位情况研究其在损伤前后的空间定位情况;然后检测Sam68与增殖细胞核抗原PCNA、凋亡相关蛋白Caspase-3在整体水平表达的相关性和荧光共定位情况;进一步通过在体外构建原代神经元凋亡和星形胶质细胞增殖模型中,敲低Sam68的表达来观察神经元凋亡和星形胶质细胞增殖情况,同时在蛋白质水平检测细胞周期蛋白Cyclin D1的表达变化来探讨Sam68在脊髓损伤后神经元凋亡和星形胶质细胞增殖中的可能分子机制和病理生理意义。结果1、在大鼠脊髓损伤模型中,Western Blot结果显示Sam68的表达在损伤6h后开始出现上调,并逐渐升高,在损伤后第3d达到最高峰,然后随着时间的推移,慢慢降低;免疫组化的检测结果与之相一致,Sam68在损伤组织中的表达量明显增加;免疫荧光共标同样提示Sam68在损伤后表达增加,并且主要存在于神经元和星形胶质细胞中,而与小胶质细胞不存在共标;另外,免疫荧光共标显示,在损伤后Sam68和神经元分别能与Caspase-3共标,Sam68和星形胶质细胞分别能与PCNA存在共标。2、在体外构建的神经元凋亡及星形胶质细胞增殖模型中,在不同的时间点分别用Western Blot检测Sam68、Caspase-3、PCNA及细胞周期蛋白Cyclin D1在细胞受到刺激后的表达变化,发现几者在刺激后的表达存在相关性。3、在敲低Sam68表达后的神经元凋亡及星形胶质细胞增殖模型中,Caspase-3、PCNA表达降低的同时也伴随Cyclin D1的表达降低,细胞周期出现阻滞。结论研究结果表明Sam68在大鼠脊髓损伤后表达明显上调,并且主要表现在神经元和星型胶质细胞中,表明它同时参与了神经元凋亡和星型胶质细胞的增殖,并且这可能由细胞周期的激活所引起。