玉米灰斑病致病菌鉴定及其遗传多样性研究

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由尾孢菌(Cerospora spp.)引起的玉米灰斑病(Gray leaf spot of maize)是一种严重的叶部病害,是影响玉米产量的主要病害之一。目前,玉米灰斑病在我国三大玉米产区(东北、黄淮海和西南玉米区)均有发生,但对其致病种一直无科学的鉴定。为了明确我国玉米灰斑病的致病菌种类及其群体遗传变异状况,本研究对玉米灰斑病主要发生地域采集的病样进行系统的检测与研究,主要研究结果如下:1.明确了我国玉米灰斑病致病菌有2个尾孢菌种:玉蜀黍尾孢(Cercospora zeae-maydis)分布于黑龙江、吉林、辽宁、山东、内蒙古等北方省份,在较早采集的云南分离物中也有该种;玉米尾孢(C. zeina)分布在西南地区四川、云南等省份。对分离自我国黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、山东、湖北、云南的136份玉米灰斑病病原菌菌株进行了基于形态学、培养特征和分子特异性检测的鉴定,将其中的65株鉴定为玉蜀黍尾孢(Cercospora zeae-maydis Tehon&Daniels),71株分离物鉴定为玉米尾孢(Cercospora zeina Crous&U. Braun)。明确了我国玉米灰斑病有2个尾孢菌致病种,玉蜀黍尾孢(C. zeae-maydis)分布于黑龙江、吉林、辽宁、山东、内蒙古等北方省份,在较早采集的云南分离物中也有该种,而玉米尾孢(C. zeina)分布区域为西南地区,在北方玉米产区还未见其踪影。玉米尾孢Cercospora zeina在中国属于首次确认。2.明确了玉蜀黍尾孢和玉米尾孢对温度、酸度的适应性以及生长速度和致病力方面的差异。对2种致病尾孢的基本特性研究表明,病菌在10~36℃温度区间可以生长,最适生长温度为24~26℃,10℃和36℃下生长极慢,玉米尾孢对较低温度适应性更强;病菌在pH4~12条件下可以生长,最适生长的pH为6~7;在同一温度和酸度条件下培养,玉蜀黍尾孢较玉米尾孢的生长速度快;多数玉蜀黍尾孢可以产生紫红色的尾孢菌素,而玉米尾孢及少数玉蜀黍尾孢不产尾孢菌素。在玉米叶片马铃薯碳酸钙(MLPCA)培养基上,25℃黑暗培养5d,灰斑病菌可产生大量分生孢子。我国不同地区的玉米灰斑病致病菌的致病力存在一定差异,这与不同地区的致病菌种类有一定关系。3.证明玉蜀黍尾孢和玉米尾孢在遗传背景方面存在差异,2个种明显分为2群,种下又分别划分为6个和2个亚群,亚群的划分与病菌的地理来源吻合,表明各地域间的病菌缺乏遗传交流,病害的发生与流行具有地域性特征。对91份玉米灰斑病菌菌株进行了遗传多样性分析。18对ISSR引物在91个菌株中获得98个种条带,84条为多态性标记,多态性比率到85.7%,平均每个引物扩增出5.4个条带。根据遗传相似性,将91个菌株划为2大群8小群,2个大群分别由玉蜀黍尾孢和玉米尾孢构成,表明2个尾孢菌种在遗传背景方面有差异,而8个亚群则基本对应于菌株的来源地,表明病菌的传播主要由田间发病植株和病残体上病菌孢子的随风扩散所致,未发生大范围的病害传播与病菌基因交流。
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