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目的: 在对胶质瘤的免疫机制研究中发现CD4+T细胞数目发生了变化,但是CD4+T细胞数目变化的机制尚未明确阐明。本实验通过应用不同浓度的锯叶棕提取物对荷瘤大鼠胶质瘤细胞GL261的作用,观察锯叶棕提取物荷瘤大鼠的生活状况,以及锯叶棕提取物对GL261胶质瘤大鼠外周血CD4+T细胞百分率的影响。从而,了解外周血CD4+T细胞百分率的变化对胶质瘤的作用,以及为CD4+T细胞成为胶质瘤治疗靶点和锯叶棕治疗胶质瘤提供依据。 方法: 1、建立荷瘤大鼠模型 将体外培养的GL261胶质瘤细胞,制成细胞悬液,注射于健康SD大鼠腹腔,约一周后将接种大鼠处死,接种腹水液中的瘤细胞于随机选取的30只大鼠右前肢背侧皮下,其余10只作为空白对照组给予相同体积的生理盐水、于相同部位进行皮下注射。 2、生活状况的评价 动物行为学观察:觅食、毛色、进食情况,精神状态,体重变化等。 3、流式细胞仪法 每组10只大鼠,眼球取血稀释后,分离单个核细胞,加入Hanks液,离心,弃上清,加入0.5mL RPMI 1640培养基重悬,细胞计数仪计数,调整细胞浓度。24孔细胞培养板中,每孔加入5×105/mL细胞,加入RPMI1640培养基,加入FITC标记的CD4抗体20μL,室温避光孵育30min,洗涤2次,稀释移入试管中,待作流式细胞术进行分析。 4、大鼠体内抑瘤试验 末次给药24h处死大鼠,称取大鼠体重,剥离瘤体,测瘤重,计算抑瘤率。 结果: 1、生活状况的评价显示 荷瘤对照组,反应性相对差;体毛明显干枯无光泽;大便稀糊状;平均进食量明显减少。有统计学意义(P<0.05)。 2、流式细胞仪法显示 经锯叶棕提取物处理组中CD4+T细胞百分率明显增加,有统计学意义(P<0.05);锯叶棕高剂量组较低剂量组CD4+T细胞百分率明显增加,有统计学意义(P<0.05)。 3、大鼠体内抑瘤试验显示 用药组与荷瘤组比较,瘤重明显减少,有统计学意义(P=0.000);SR高剂量组与低剂量组比较,抑瘤率明显增高,有统计学意义(P<0.05)。 结论: 锯叶棕提取物能够通过增加CD4+T细胞来发挥抑制肿瘤的作用。