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目的:研究显示乙醇通过减少八聚体结合转录因子1(Octamer-bindingtranscription factor 1,Oct-1)与Slc7a11基因启动子结合,增加毛色基因Slc7a11表达,且Sla7a11基因可使绵羊长出棕色/黄色的毛斑块,推测Oct-1在毛色形成方面可能发挥着重要的作用。然而,Oct-1在毛色形成过程中是否起作用尚不清楚。本实验通过克隆小鼠Oct-1基因序列以及基因和蛋白表达量的检测,进而探索其是否影响毛色主效基因的表达及调控黑色素的生成。方法:运用生物信息学软件分析小鼠Oct-1基因;采用普通PCR方法克隆Oct-1基因cDNA序列,构建真核表达载体;转染后,采用分光光度计对小鼠黑素细胞中黑色素含量进行测定;进行Real-time PCR实验检测转染后黑素细胞中毛色主效基因在mRNA水平表达量的变化,Western blot实验检测转染后细胞中MITF、TYR、TYRP-1和TYRP-2蛋白水平的变化。结果:(1)生物信息学分析获得小鼠Oct-1基因大小为2313 bp;通过Transfec启动子分析软件找出Oct-1可以调节的毛色主效基因,参与调控13个黑色素形成相关基因转录表达,在黑色素生成关键基因MITF、TYR、TYRP-1、TYRP-2的启动子上存在Oct-1转录因子的作用位点。(2)克隆小鼠Oct-1基因全长cDNA序列,成功构建真核表达载体,载体上连有Oct-1的序列、特异性TYRP-2基因启动子和启动报告基因绿色荧光蛋白,经测序验证序列正确性。(3)小鼠黑素细胞转染Oct-1基因后,在荧光显微镜下可观察到黑素细胞带有绿色荧光;且通过荧光定量PCR检测Oct-1 mRNA表达量显著增加,说明转染效率明显;通过荧光分光光度计检测显示,转染后小鼠黑素细胞中黑色素含量减少,说明Oct-1对黑色素的生成有抑制作用。(4)荧光定量PCR结果显示,转染组 MITF 和 TCF mRNA 显著降低,Ras、Frizzled、ERK2 和 TYRP-2 mRNA 的表达未见变化,TYR、α-MSH、AC、c-kit和ETB-R mRNA的表达量显著增加,TYRP-1、ET1,CAM mRNA的表达量升高。蛋白免疫印迹结果显示,转染组MITF蛋白显著降低,TYR和TYRP-1蛋白升高,TYRP-2蛋白未见变化。结论:过表达Oct-1后,黑素细胞中MITF和TCF的表达降低,TYR、TYRP-1、α-MSH、AC、c-kit、ET1、ETB-R和CAM的表达增加。揭示Oct-1可以通过调节毛色主效基因的表达,来调控黑色素形成。