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侵袭性牙周炎(AgP)是发生于全身健康者的进展迅速、有家族聚集性、不同于慢性牙周炎的一类牙周炎,是造成健康人失牙的主要因素之一。侵袭性牙周炎病因尚未完全明了,以往研究表明,侵袭性牙周炎的发生与白细胞功能异常有关。为了进一步研究侵袭性牙周炎患者中导致白细胞功能异常的致病机理,本实验室前期通过基因芯片筛选获得48个显著差异表达的基因,由于基因芯片检测可能存在假阳性或假阴性结果,为验证芯片检测结果以及初步确定侵袭性牙周炎相关特异性基因,本实验从48个显著差异表达的基因中挑选出4个表达差异极显著基因进行实验,即LRPPRC、DHRS2、PAFAH2和HSPC159。
首先通过荧光定量PCR方法检测这4个基因mRNA表达水平,发现LRPPRC(显著表达上升)、DHRS2(表达上升)、PAFAH2(表达下降)和HSPC159(显著表达下降)的检测结果与基因芯片检测相符合。由于HSPC159基因是一个未知基因,故选择LRPPRC、DHRS2、PAFAH2进行Western-blot检测,对HSPC159进行生物信息学分析。
Western-blot分析结果表明,与正常健康者和慢性牙周炎患者(CP)相比,AgP患者外周血白细胞中LRPPRC和DHRS2蛋白表达显著升高,PAFAH2蛋白表达显著下降。根据在mRNA转录表达水平和蛋白表达水平变化一致,初步判断LRPPRC、DHRS2和PAFAH2与侵袭性牙周炎之间可能存在密切关系,本实验将为进一步研究这些基因在侵袭性牙周炎发病中的作用提供实验依据。
HSPC159的生物信息学分析发现其与半乳糖结合凝集素(Galeetin)蛋白在同源序列、蛋白分子三级结构、结构域及蛋白功能方面具有很大相似性,提示HSPC159属于Galcctin家族并具有与Galectin相似的生物学功能。Galectin家族是凝集素超家族中的一个家族,在细胞增殖、凋亡、细胞黏附和趋化等方面有重要功能。AgP患者普遍存在多形核白细胞(polymorphonuclcar Icukocytcs,PMN)功能缺陷,主要表现为PMN的趋化功能降低,吞噬及杀菌作用减弱,粘附功能升高,在细菌刺激下产生超氧阴离子和脱粒作用增强等。推测HSPC159蛋白在调节细胞增殖、细胞凋亡、细胞黏附和趋化白细胞等方面具有重要功能。AgP患者白细胞中HSPC159表达显著下降,可能是造成AgP患者白细胞功能缺陷的一个原因。
综合所有实验研究结果,初步确定LRPPRC、DHRS2、PAFAH2和HSPC1594个基因与侵袭性牙周炎之间存在密切相关性,实验结果将为侵袭性牙周炎的发病机理、诊断以及治疗提供详实的实验数据。