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中国拥有丰富的水牛(Bubalus bubalus,Bb)资源,同奶牛一样受到牛结核病(Bovine Tuberculosis,b TB)的威胁,而患病牛又是人结核病的重要传染源。我国水牛结核病的控制措施为“检测扑杀”,所以准确检测是有效控制水牛结核病的关键。水牛结核病的检测方法都是沿用奶牛结核病诊断方法和判断标准。因为水牛与奶牛在分类上同为牛科但不同属的物种,用于奶牛结核病的检测方法在水牛的准确度较低。因此,本研究旨在评价牛结核菌素皮内变态反应(简称皮试法)在水牛上的应用。同时,建立水牛结核病γ-干扰素检测方法。主要结果如下:水牛结核病阳性样本的建立首先用皮试法与抗体检测法检测水牛样品,确定免疫接种之前所选水牛为阴性,判定标准是两种方法皆为阴性则判定为阴性;随后用BCG接种水牛,制造标准阳性样本,再于不同时间分别检测结核抗体水平与皮试差异值,判定标准是两种方法中有一种为阳性则判定为转阳。经过动物实验,最终成功得到阴性样本71头,接种BCG后,累计转阳45头。水牛皮试法的标准化利用得到的水牛皮试法检测结果与前期奶牛皮试法检测结果进行比对与分析。首先确认水牛与奶牛的皮厚值之间存在明显差异,随后确认不同品种水牛之间的皮厚值无明显差异。再通过比较免疫BCG后不同时间的皮试检测结果,分析不同时间的皮厚差变化与判定标准的变化,最后将数据进行汇总,绘制ROC曲线,确定cut-off值为2.495mm。抗水牛IFN-γ单克隆抗体与多克隆抗体的制备利用原核表达的水牛γ-IFN(Bb IFN-γ)免疫小鼠与大耳白兔,制备单克隆抗体与多克隆抗体,经过筛选,成功得到6株稳定分泌Ig M型抗体的单克隆细胞,命名为:2A9、7C4、9B6、9H2、10E2、10H4。免疫三只大耳白兔,得到3批兔高免血清,制备多克隆抗体后的效价分别为2.56×104、5.12×104、1.02×105,其中3号兔血清效价最高,为1.02×105。综上所述,本研究成功确定了水牛皮试法的诊断标准,并制备了抗水牛IFN-γ单克隆抗体与多克隆抗体,为下一步IFN-γ的检测奠定基础,同时也为水牛结核病的综合防控提供支持。