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草菇（Volvariellavolvacea）作为一种大面积栽培的食用菌，存在着不耐低温的问题：在4℃条件下保存时，菌丝体会发生自溶而死亡，子实体会发软、液化直至腐烂，这给草菇菌种的保存和产后的保鲜带来了极大的困难。本文首次通过基因组重排技术，采用双亲灭活标记，经过低温筛选成功选育出3株正常出菇的草菇耐低温菌株。本文通过对草菇原生质体制备和再生条件的优化、草菇突变体库的构建、双亲灭活递归式原生质体的融合、耐低温重排子的筛选，获得如下主要研究结果：1.研究并建立了草菇原生质体的制备和再生的最佳条件。最优的原生质体制备条件：选择培养60h的草菇菌丝，在溶壁酶浓度为1.5%，酶解温度32℃条件下酶解3h，并以0.6mol/L的甘露醇为渗透压稳定剂；最优的再生条件为：选择培养84h的草菇菌丝，在溶壁酶浓度为1.5%条件下酶解2h，并以0.6mol/L的甘露醇为渗透压稳定剂配制再生培养基，于32℃的恒温培养箱中培养。2.采用紫外诱变、化学诱变、电子束诱变和60Co-γ诱变这4种诱变方法分别对16个草菇原始菌株（耐低温：0℃，10h）进行诱变，通过耐低温处理和稳定性实验，最终筛选得到一个耐低温效果明显提高且拥有194个突变株的突变库，耐低温性达到0℃，24h，是原始菌株耐低温性的2.4倍。3.通过对草菇原生质体灭活条件的研究，最终确定原生质体热灭活的条件为50℃，3min，紫外灭活时间为110s；然后对这两组灭活的原生质体进行PEG融合并对融合条件进行优化，得到最优的融合条件：PEG浓度为40%，pH8.0，在32℃条件下融合30min，融合率达到0.517%。4.经过4轮基因组重排，筛选得到耐低温（0℃，48h）的第四代重排株15株(F4)，其耐低温性是原始菌株的4.8倍；并对其中遗传稳定性较好的9株进行出菇实验，最后成功出菇3株，其子实体在10℃条件下储藏期分别为25h、32h、48h，是原始菌株中最耐低温的V23储存期的1.56、2.00、3.00倍。由此可见，将基因组重排技术用于草菇的耐低温选育是可行的。本文首次将基因组重排技术用于食用菌方面，为食用菌的选育提供了新思路。