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第一部分染色质免疫沉淀技术分析HePG2细胞TCF7L2蛋白与胰岛素降解酶基因转录启动子的结合目的检测转录因子TCF7L2是否可与IDE基因的启动子区域DNA结合.方法选用人肝癌HePG2细胞株，应用TCF7L2抗体染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay，ChIP)结合PCR技术检测IDE基因启动子序列,以确定转录因子TCF7L2可否与IDE基因启动子结合。结果在特异性TCF7L2抗体免疫沉淀的DNA片段中扩增出IDE基因启动子序列。结论在HePG2细胞内，转录因子TCF7L2可与IDE基因转录启动子的特异区域结合，进而可能参与IDE基因的表达调控.为本实验进一步研究TCF7L2RNA干扰对IDE基因表达的影响奠定了理论基础。第二部分靶向抑制TCF7L2的表达对胰岛素降解酶基因表达的影响目的构建靶向TCF7L2基因的慢病毒载体LV-TCF7L2-shRNA，研究其对人HePG2细胞TCF7L2基因的抑制作用，并观察靶向抑制TCF7L2基因后，对胰岛素降解酶表达的影响。方法1.以人TCF7L2mRNA编码序列作为干扰靶点，构建TCF7L2特异性短发卡RNA慢病毒表达载体LV-TCF7L2-shRNA及阴性对照载体LV-NC-GFP-shRNA。2.将人HePG2细胞分为3组：干扰组、阴性对照组和空白对照组，干扰组加入LV-TCF7L2-shRNA；阴性对照组加入LV-NC-GFP-shRNA；空白对照组不予以处理。3.实时定量PCR法检测TCF7L2和IDE mRNA的表达，Westernblot法检测TCF7L2和IDE蛋白的表达。结果1.实时定量PCR及Western blot结果显示干扰组HePG2细胞TCF7L2mRNA及蛋白的表达水平较空白组及阴性对照组显著降低(P<0.05)。2. HePG2细胞TCF7L2表达受到抑制后，干扰组IDE mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)，而两组对照组之间相比较无显著性差异(P>0.05)。结论成功构建TCF7L2shRNA慢病毒载体LV-TCF7L2-shRNA。靶向抑制TCF7L2的表达有效地抑制了胰岛素降解酶的表达，提示TCF7L2可能是胰岛素降解酶表达调控中重要的转录因子。