目的：建立LC-MS/MS法同时测定人血浆中R-华法林和S-华法林，应用于评价吗啉硝唑对华法林代谢的影响。　　 方法：以甲氯噻嗪为内标，经乙醚：二氯甲烷(3∶2，v/v)提取后经手性色谱柱Astec Chirobiotic TMV(150mm×4.6mmI.D.,5μm)分离。流动相为5mmol.L-1醋酸铵水溶液(pH4.0)-乙腈(72∶28，v/v)，流速为1.5mL.min-1（柱后分流，离子源：废液体积比-1∶2）。采用API4000型三重四级杆串联质谱仪，电喷雾电离源，多反应监测方式（MRM）进行负离子检测。定量分析的离子对分别为m/z307→m/z161（华法林）和m/z358→m/z322（内标甲氯噻嗪）。采用随机双周期交叉实验设计，给予12名健康受试者华法林或同时给予吗啉硝唑和华法林，按时间点采集血样，以上述方法测定血浆中R-华法林和S-华法林浓度。　　 结果：R-华法林和S-华法林的保留时间均小于5min，且分离度为1.56。R-华法林和S-华法林的线性范围均为5-1000ng·mL-1，日内和日间精密度(RSD)均小于10％，准确度(RE)在－4.9％～0.7％之间。同时给予吗啉硝唑和华法林以及单独给予华法林后，R-华法林和S-华法林的AUC0→168几何均数比值的90％置信区间均在800％～125％之内，Cmax几何均数比值的90％置信区间均在80％～125％之内。　　 结论：本文建立的对映体选择性测定人血浆中的R-和S-华法林的液相色谱-串联质谱法快速、灵敏，适用于药物对华法林代谢相互作用的研究。临床药动学实验结果表明，吗啉硝唑对华法林的代谢没有显著影响。