Rab27AmRNA与人乳腺癌细胞侵袭转移能力相关性的体内外研究

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目的检测人乳腺癌细胞中Rab27A的定位、表达情况,在体内外研究Rab27A与乳腺癌细胞侵袭转移能力相关性。方法1、采用SYBR GREEN法实时半定量RT-PCR技术,检测Rab27A在四种人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435和MDA-MB-435HM中的mRNA,应用Western-blot检测Rab27AmRNA在四种人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435和MDA-MB-435HM中的蛋白表达。2、应用免疫荧光(immunofluorescence)及激光共聚焦(confocal)扫描成像技术显示Rab27A蛋白在乳腺癌细胞中的定位。3、裸鼠乳房脂肪垫(mammary fat pad,MFP)接种人乳腺癌细胞,探讨Rab27A过表达对裸鼠原位肿瘤生长及肺转移的影响。结果1、Rab27A mRNA及蛋白在人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435及MDA-MB-435HM中的表达水平随细胞侵袭转移能力的增强而升高。2、在人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435中,Rab27A弥散性分布于细胞浆中,而在后两者中又可见Rab27A蛋白在核周凝聚。3、Rab27A高表达细胞克隆组裸鼠肺转移率增高,MDA-MB-231组由10%增加到50%(P(0.01),MDA-MB-435组由60%增加到90%(P<0.05),平均每个肺内的转移灶数目亦明显增多,在MDA-MB-231组和MDA-MB-435组分别达到对照组的5倍和2.5倍(P<0.01),肺转移灶体积增大,且可见多个转移灶融合现象。结论Rab27A的表达水平随乳腺癌细胞侵袭转移能力的增强而升高,在体内影响裸鼠原位移植瘤生长和肺转移灶的形成,说明Rab27A表达可能与乳腺癌细胞侵袭转移能力有关。
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